(R)-泛内酯的对映选择性生产

摘要：

本发明涉及在作为辅因子的NADH存在下，使用NADPH依赖性酶在生物催化过程中通过酮‑泛内酯转换形成高度富集的(R)‑泛内酯。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202180069797.9

申请日期：2021-10-14

公开/公告号：CN116391045A

公开/公告日：2023-07-04

主分类号：C12P41/00(2006.01)

申请/专利权人:帝斯曼知识产权资产管理有限公司

发明/设计人:乔纳森·艾伦·米德洛克;奥利弗·梅;莫尼卡·米勒;琳达·安德里亚·劳拉·维蒙特

主申请人地址:荷兰海尔伦

专利代理机构:北京东方亿思知识产权代理有限责任公司

代理人:谭玲玲

国别省市代码:荷兰;NL

权利要求：

1.一种用于将酮-泛内酯对映选择性转换为R-泛内酯的方法，所述方法包括在NADH或NAD+和NADPH依赖性酶的存在下孵育酮-泛内酯。 2.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶选自醇脱氢酶EC酶(EC 1.1.1.2)或泛解酸4-脱氢酶(EC 1.1.1.106)。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其中pH在约7.5至约4.5的范围内。 4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中还原酶是源自假丝酵母属(Candida)、埃希氏菌属(Escherichia)或寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)，特别地选自近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)或嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)的醇脱氢酶，优选地为来自嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)NBRC 14161的Sma_KPR，来自近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)IFO 0708的Cpa_PKR_2，最优选地与SEQ ID NO:1具有至少约80％同一性的来自嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)NBRC 14161的Sma_KPR或与SEQ ID NO:3具有至少约80％同一性的来自近平滑假丝酵母IFO 0708的Cpa_PKR_2。 5.根据权利要求4所述的方法，其中所述还原酶是商购可得的NADPH依赖性醇脱氢酶，特别是源自大肠杆菌的醇脱氢酶(ADH)，例如ADH 440(evo-1.1.440.S，evoXX technologyGmbH,Germany)。 6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述酶用作重组全细胞生物催化剂或用作无细胞提取物。 7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，所述方法进一步包括原位辅助因子再生系统，特别地包括葡糖脱氢酶和葡萄糖。 8.一种用于生产对映体过量(e.e.)为至少约99％的(R)-泛内酯的方法，所述方法包括在对映选择性ADH，特别是选自近平滑假丝酵母或嗜麦芽寡养单胞菌的ADH酶，优选地来自嗜麦芽寡养单胞菌NBRC 14161的Sma_KPR或来自嗜麦芽寡养单胞菌IFO 0708的Cpa_PKR_2，最优选地与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3具有至少约80％同一性的酶存在下，在约7.5的pH下对映选择性还原酮-泛内酯。 9.一种用于生产e.e.为至少约94％的(R)-泛内酯的方法，所述方法包括在源自大肠杆菌的对映选择性ADH，特别是ADH 440(evo-1.1.440.S,evoXX technology GmbH,Germany)存在下在约5.5的pH下对映选择性还原酮-泛内酯。 10.根据权利要求9所述的方法，其中所述(R)-泛内酯的产率为至少约59％。