Cebpa基因缺失斑马鱼突变体的制备及其应用

摘要：

本发明公开了一种Cebpa基因缺失斑马鱼突变体的制备及其应用；设计针对斑马鱼cebpa基因的TALEN序列；构建其左右臂质粒，并体外转录出相应的mRNA；将TALEN左右臂mRNA混合并显微注射到斑马鱼受精卵中；注射后的胚胎养至F0成鱼与野生型成鱼交配，将携带有cebpa基因突变的胚胎养至F1成鱼；含有cebpa基因突变的F1成鱼再与野生型成鱼交配，产生的胚胎养至F2成鱼，通过剪鱼尾鳍抽提基因组DNA的方法鉴定，确定所述突变体。本发明通过TALEN基因编辑技术，能够快速高效的建立cebpa基因缺失斑马鱼品系，利用该模型能够开展针对治疗白血病，肝脏发育不良以及粒细胞缺失等疾病的药物筛选工作。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201810087330.7

申请日期：2018-01-30

公开/公告号：CN108103108A

公开/公告日：2018-06-01

主分类号：C12N15/89(2006.01)I

申请/专利权人:上海交通大学医学院附属瑞金医院

发明/设计人:袁浩;周隽;朱军

主申请人地址:200025 上海市黄浦区瑞金二路197号

专利代理机构:上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227

代理人:曹莉

国别省市代码:上海;31

权利要求：

一种Cebpa基因缺失斑马鱼突变体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、设计针对斑马鱼cebpa基因的TALEN序列；S2、构建TALEN的左、右臂质粒，并分别体外转录出TALEN左、右臂mRNA；S3、将TALEN左、右臂mRNA混合并显微注射到斑马鱼受精卵中；S4、将注射后的胚胎养至F0成鱼，并与野生型成鱼交配，对产生的胚胎进行限制性内切酶方法以及DNA测序方法鉴定，将携带有cebpa基因突变的胚胎养至F1成鱼；S5、对F1成鱼进行剪鱼尾鳍抽提基因组DNA方法鉴定是否存在cebpa基因突变，并通过DNA测序方法确定其cebpa基因突变类型，将含有cebpa基因突变的F1成鱼再次与野生型成鱼交配，产生的胚胎养至F2成鱼；S6、对F2成鱼通过剪鱼尾鳍抽提基因组DNA的方法鉴定，确定突变鱼系，该突变鱼系即所述Cebpa基因缺失斑马鱼突变体。