一种丝素纤维固定化壳聚糖水解酶的制备方法

摘要：

本发明一种丝素纤维固定化壳聚糖水解酶的制备方法以蚕丝纤维为原料，通过碳酸钠溶液处理，脱去蚕丝纤维表面的丝胶，然后经充分洗涤除去残留的碳酸钠，制备出丝素纤维。利用蛋白质交联剂通过共价键结合方法将壳聚糖水解酶固定化在丝素纤维上。通过本发明将壳聚糖水解酶固定化在丝素纤维上，可以有效提高壳聚糖水解酶的稳定性，尤其是本发明固定化壳聚糖水解酶具有在高离子强度和高粘度的壳聚糖胶体中能保持活性的特性，从而在壳聚糖胶体水解过程中具有更好的稳定性和更长的使用寿命。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201710910116.2

申请日期：2017-09-29

公开/公告号：CN107446910A

公开/公告日：2017-12-08

主分类号：C12N11/02(2006.01)I

申请/专利权人:江西师范大学

发明/设计人:游清徽;王曼莹;蔡险峰

主申请人地址:330022 江西省南昌市紫阳大道99号

专利代理机构:南昌市平凡知识产权代理事务所 36122

代理人:许艳

国别省市代码:江西;36

权利要求：

一种丝素纤维固定化壳聚糖水解酶的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括如下步骤：步骤1：丝素纤维的制备将蚕丝纤维浸泡于沸腾的0.5 wt%‑1.0 wt%的碳酸钠溶液中60‑240 min，充分除去蚕丝纤维表面的丝胶，其后经过滤、纯净水洗涤至洗出液中不含碳酸钠成分时为止，滤饼经烘干得到丝素纤维；步骤2：壳聚糖水解酶聚集体的制备壳聚糖水解酶溶于pH值为5.0‑8.0、离子强度为0.1‑0.5 mol/L的磷酸盐缓冲液，得到浓度为0.5‑10 mg/mL的壳聚糖水解酶溶液，然后以孔径为0.22 μm 的除菌过滤器过滤，收集滤过液；其后在滤过液中加入20 wt%‑65 wt%的沉淀剂，沉淀0.5‑5 h，无需过滤分离，即得壳聚糖水解酶聚集体；步骤3：丝素纤维固定化壳聚糖水解酶的制备控制壳聚糖水解酶聚集体与丝素纤维质量比为1:5‑1:50，将丝素纤维加入壳聚糖水解酶聚集体中，再加入蛋白质交联剂至终浓度为0.05 wt%‑0.5 wt%，维持4‑40℃搅拌反应1‑18 h，取出丝素纤维并用离子强度为0.1‑0.5 mol/L的磷酸盐缓冲液洗去未固定化于丝素纤维的壳聚糖水解酶，经抽滤、冷冻干燥，得到丝素纤维固定化壳聚糖水解酶。