一种从生物量低且富含腐殖质的土壤中提取微生物总DNA的方法
本发明公开了一种从生物量低且富含腐殖质的土壤中提取微生物总DNA的方法。本发明方法包括：(1)通过液氮对生物量低且富含腐殖质的土壤样品进行研磨来裂解其中的微生物细胞；(2)使用DNA提取缓冲液、蛋白酶K和20％SDS在不同温度水浴下进一步裂解微生物细胞并使蛋白变性后，离心；(3)在低温状态下通过异丙醇沉淀DNA，得到DNA粗提产物；(4)使用QIAGEN土壤DNA提取试剂盒纯化步骤(3)所得DNA粗提产物，得到微生物总DNA；其中，DNA提取缓冲液的pH为8.0，包括0.1M NaH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>、0.1M Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>、0.1M EDTA、0.1M Tris‑HCl、1.5M NaCl和1％CTAB；蛋白酶K的浓度为10mg/mL。本发明方法可以进行大质量的土壤DNA高效提取，且提取得到的DNA的纯度高、完整度好，具有良好的应用前景。
发明专利
CN201710810591.2
2017-09-11
CN107475249A
2017-12-15
C12N15/10(2006.01)I
广东美格基因科技有限公司
邝嘉良;束文圣;叶脉;徐卓菲;李猛;张传伦
518000 广东省深圳市前海深港合作区前湾一路1A栋201室
广东;44
一种从生物量低且富含腐殖质的土壤中提取微生物总DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)通过液氮对生物量低且富含腐殖质的土壤样品进行研磨来裂解其中的微生物细胞；(2)使用DNA提取缓冲液、蛋白酶K和20％SDS在不同温度水浴下进一步裂解微生物细胞并使蛋白变性后，离心；(3)在低温状态下通过异丙醇沉淀DNA，得到DNA粗提产物；(4)使用QIAGEN土壤DNA提取试剂盒纯化步骤(3)所得DNA粗提产物，得到微生物总DNA；其中，所述DNA提取缓冲液的pH为8.0，包括0.1M NaH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>、0.1M Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>、0.1M EDTA、0.1M Tris‑HCl、1.5MNaCl和1％CTAB；所述蛋白酶K的浓度为10mg/mL。