microRNA探针一步法实时荧光定量PCR检测方法
本发明公开了microRNA探针一步法实时荧光定量PCR检测方法。本发明提供了一种一步法实时荧光定量PCR检测待测microRNA的引物和探针，包括特异性长链引物RP1、特异性长链引物RP2、短链引物P1、短链引物P2和特异性探针PR；本发明在两步法荧光定量的基础上优化为一步法荧光定量PCR，所有反应所需试剂一次加入反应体系中，实验过程简单易操作；逆转录和qPCR过程在一个反应管中进行，避免了反复开盖过程，降低了污染的风险；整个反应时间相对于两步法荧光定量PCR大大缩短，节省了实验时间；实验过程步骤减少，降低了人为误差，使反应灵敏度也大大提高。
发明专利
CN201710795422.6
2017-09-06
CN107354227A
2017-11-17
C12Q1/68(2006.01)I
苏州吉玛基因股份有限公司
石立立;杨林;张佩琢
215123 江苏省苏州市工业园区东平街199号
北京纪凯知识产权代理有限公司 11245
关畅%白艳
江苏;32
一种一步法实时荧光定量PCR检测待测microRNA的引物和探针，包括特异性长链引物RP1、特异性长链引物RP2、短链引物P1、短链引物P2和特异性探针PR；所述特异性长链引物RP1的核苷酸序列从5’至3’末端依次由非特异性的通用序列A和特异性序列A’组成；所述非特异性的通用序列A为不与所述待测microRNA结合的片段；所述特异性序列A’为与所述待测microRNA 3’末端起10到12个碱基组成的片段互补的序列；所述特异性长链引物RP2的核苷酸序列从5’至3’末端依次由非特异性的通用序列B和特异性序列B’组成；所述非特异性的通用序列B为不与所述待测microRNA结合的片段；所述特异性序列B’为与所述待测microRNA 5’末端起10到12个碱基组成的片段相同的序列；所述短链引物P1的序列与所述非特异性的通用序列A的序列相同或互补相同；所述短链引物P2的序列与所述非特异性的通用序列B的序列相同或互补相同；所述特异性探针PR从5’末端起依次由C和D组成，C为与所述特异性长链引物RP2核苷酸序列3’末端起1‑18个碱基序列相同或反向互补，D为与所述待测miRNA序列5’末端起第1‑18个碱基序列相同或反向互补。