一种体外表达大腹园蛛牵引丝蛋白的新方法

摘要：

本发明公开了一种体外表达大腹园蛛牵引丝蛋白的新方法。本发明首次构建出16倍体的拟大腹园蛛牵引丝蛋白基因的表达载体，并在大肠杆菌Rosetta（DE3）细胞株中成功表达，同时优化了表达体系，整个流程简便高效。本发明首次成功实现了大腹园蛛高分子牵引丝蛋白的体外表达，为今后利用高新技术大量生产大腹园蛛高分子牵引丝蛋白提供可靠的方法和途径，服务于社会的实际需求，具有很好的应用前景。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201710730292.8

申请日期：2017-08-23

公开/公告号：CN107365791A

公开/公告日：2017-11-21

主分类号：C12N15/70(2006.01)I

申请/专利权人:中山大学

发明/设计人:王方海;刘婷婷

主申请人地址:510275 广东省广州市海珠区新港西路135号

专利代理机构:广州粤高专利商标代理有限公司 44102

代理人:陈卫

国别省市代码:广东;44

权利要求：

一种大腹园蛛牵引丝蛋白的表达载体，其特征在于，构建方法如下：S1. 将16倍串联体的拟大腹园蛛牵引丝蛋白基因的克隆载体以<i>Nhe </i>I和<i>Hind </i>Ⅲ两种限制性内切酶进行酶切，回收目的基因片段；S2. 将pET‑28a‑c(+)质粒用限制性内切酶<i>Spe </i>I 和 <i>Hind</i> III进行双酶切，回收线性载体；S3. 将回收的目的基因片段和线性载体进行连接；S4. 将连接产物转化大肠杆菌Rosetta（DE3）表达型感受态细胞；S5. 转化后的细胞在含Kan和氯霉素的选择性培养基上进行铺板培养，筛选阳性重组子。