CRISPR/Cas9靶向敲除人CNE10基因及其特异性gRNA

摘要：

本发明属于分子生物学与生物医学技术领域，具体地说本发明涉及基于CRISPR/Cas9系统的gRNA序列及其组合在敲除人矮小同源合基因（SHOX）保守非编码序列CNE10的应用以及在CNE10调控SHOX基因相关疾病发生过程中的研究。本发明根据CRISPR/Cas9的设计原则，在CNE10基因组的上下游各设计2个最有效靶点，其序列表如SEQ ID NO.1‑4所示，然后将其分别构建在px458载体上，并在CNE10基因组的上下游各筛选得到1个向导RNA（gRNA）。在人骨肉瘤细胞（U2OS）中利用这2个gRNA介导的CRISPR/Cas9系统，可以有效的敲除SHOX保守非编码序列CNE10，该系统操作简便、敲除效率高，适用于研究基因多种功能的细胞模型。本发明涉及的gRNA有望在CNE10调控SHOX基因相关疾病（软骨细胞发育异常、孤独症、Rett综合征及胰腺发育不全）治疗中得到推广应用。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201710628429.9

申请日期：2017-07-28

公开/公告号：CN107267515A

公开/公告日：2017-10-20

主分类号：C12N15/113(2010.01)I

申请/专利权人:重庆医科大学附属儿童医院

发明/设计人:朱岷;辛世杰;徐雪姣;许珂;毛会英;李莉;宋萃

主申请人地址:400014 重庆市渝中区中山二路136号

国别省市代码:重庆;85

权利要求：

在CRISPR‑Cas9 特异性敲除人骨肉瘤细胞（U2OS）SHOX保守非编码序列CNE10中用于靶向CNE10的gRNA组合，其对应的 DNA 序列如SEQ ID NO.1和 SEQ ID NO. 4序列所示。