一种人脐带间充质干细胞的培养方法
本发明公开了一种人脐带间充质干细胞的培养方法，其包括以下步骤：(1)获取脐带组织；(2)分离华通氏胶；(3)将华通氏胶切割成组织块，将组织块接种至T75培养瓶中，加入适量原代培养基置于CO<sub>2</sub>培养箱中培养，前3天静置培养，第4天补加原代培养基5ml，之后每2天‑3天换一次液，在大部分组织块都有细胞爬出时去掉组织块，换液，在细胞密度达到80％或以上时进行传代扩增；(4)处理后，用传代培养基重悬，传代。本发明的有益之处在于：(1)在培养过程中，不使用动物来源的添加物，更加安全；(2)操作简单方便，培养时间短。
发明专利
CN201710437614.X
2017-06-12
CN107189982A
2017-09-22
C12N5/0775(2010.01)I
北京焕生汇生物技术研究院
姚玲玲;孟得龙;杨敏;杨苗;宋丹;刘得娟
100041 北京市石景山区实兴大街30号院3号楼10层1002房间
北京世誉鑫诚专利代理事务所(普通合伙) 11368
魏秀枝
北京;11
一种人脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1：取健康产妇39周～40周正常分娩或剖腹产脐带组织，手术室洁净条件下，将脐带组织放入预先加注有100ml组织保护液的T75培养瓶中，密封，2℃～8℃条件下保存；Step2：将脐带组织置于百级超净台环境下的培养皿中，用PBS将组织表面血污清洗干净，然后将脐带剪成小段，并去除脐带内2条动脉和1条静脉以及脐带表面羊膜，剩余部分即为华通氏胶，最后用镊子和手术刀分离出华通氏胶；Step3：配制原代培养基，成分为：α‑MEM培养基90ml、UltraGRO营养添加物10ml、肝素钠200IU、硫酸庆大霉素8000IU；Step4：配制传代培养基，成分为：α‑MEM培养基475ml、UltraGRO营养添加物25ml、肝素钠1000IU、硫酸庆大霉素40000IU；Step5：将分离出的华通氏胶置于培养皿中，用手术刀切割成很小的组织块，然后将组织块接种至T75培养瓶中，置于CO<sub>2</sub>培养箱中倒置1h，1h后加入适量原代培养基使组织块湿润，之后将培养瓶置于CO<sub>2</sub>培养箱中培养，前3天静置培养，第4天补加原代培养基5ml，观察生长情况，之后每2天‑3天换一次液，在大部分组织块都有细胞爬出时，去掉组织块，换液，在细胞密度达到80％或以上时进行传代扩增；Step6：用移液器移去T75培养瓶内的细胞培养液，用PBS清洗，然后向T75培养瓶中加入4倍稀释的Accutase酶液6ml，消化1min‑2min，离心收集细胞，弃去上清液，收集的细胞用D‑PBS离心洗涤一次，弃去上清液，用传代培养基重悬，传代，传代密度为10000个细胞/cm<sup>2</sup>‑15000个细胞/cm<sup>2</sup>。