一种AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法

摘要：

本发明公开一种AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法，具体地使用携带GFP的AAV质粒、pHelper质粒、pRC质粒在助感染试剂VGF‑001的作用下，进行AAV6型腺相关病毒包装，收获病毒后进行纯化、浓缩，将制得的AAV6型腺相关病毒对T细胞进行感染，采用免疫荧光法结合流式细胞术检测细胞的感染效率，结果显示，本发明AAV6病毒体外感染人T细胞，实现了对人T细胞的高效感染，感染效率可达80～90％，甚至更高，这是其他基因转染方法无法比拟的，为T细胞体外研究的学者们解决了一大难题，也为细胞治疗的临床研究打下坚实的基础。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201710335924.0

申请日期：2017-05-12

公开/公告号：CN107142279A

公开/公告日：2017-09-08

主分类号：C12N15/864(2006.01)I

申请/专利权人:山东维真生物科技有限公司

发明/设计人:周静;孙秀莲

主申请人地址:250101 山东省济南市高新区港源四路416号

专利代理机构:东莞市华南专利商标事务所有限公司 44215

代理人:刘克宽

国别省市代码:山东;37

权利要求：

一种AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)病毒包装：先铺好HEK 293T细胞，待细胞密度达80～90％时换成无血清DMEM培养基，将提前按一定比例混合好的A、B溶液加入到培养基中，继续培养72h后收集病毒，将病毒液进行纯化、浓缩，并检测病毒滴度和纯度，即得病毒液；(2)病毒感染：将T细胞铺于96孔板中，CD3/CD28进行刺激以激活T细胞，待激活后的T细胞密度达70～80％时，加入步骤(1)制得的病毒液，病毒的感染复数MOI为10E6，24h后免疫荧光法结合流式细胞术检测细胞的感染效率。