一种丁二酮高产乳酸菌的高通量筛选方法

摘要：

本发明提供了一种丁二酮高产乳酸菌的高通量筛选方法，将待筛选的乳酸菌接入含有培养基的多孔板Ⅰ中扩培；将扩培后的乳酸菌接种到含脱脂乳的多孔板Ⅱ中，待凝乳后，离心多孔板Ⅱ；离心后取上清液到多孔板中，用酶标仪测定吸光度，取其平均值，OD值高于0.37即为丁二酮高产乳酸菌。本发明的方法综合多孔板培养、发酵，多孔板‑酶标仪相耦合快速检测以及排枪的使用，效率可提高约159‑751倍，为丁二酮高产菌的筛选提供了简便、高效的方法，而且该发明的回收率、稳定性好。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201710325914.9

申请日期：2017-05-10

公开/公告号：CN107189944A

公开/公告日：2017-09-22

主分类号：C12N1/02(2006.01)I

申请/专利权人:上海应用技术大学

发明/设计人:田怀香;史雨桦;陈臣;于海燕

主申请人地址:200235 上海市徐汇区漕宝路120号

专利代理机构:上海申汇专利代理有限公司 31001

代理人:吴宝根

国别省市代码:上海;31

权利要求：

一种丁二酮高产乳酸菌的高通量筛选方法，其特征在于包括如下步骤：1）取待测样品，加入无菌水，10倍梯度稀释，振荡，取上清液涂布于MRS琼脂培养基中培养至长出单菌落，即为待筛选乳酸菌；2）在无菌条件下，取待筛选乳酸菌，接种于含有MRS肉汤培养基的多孔板中，活化3代后，待用；3）将活化后的乳酸菌，接种于灭菌脱脂乳中，在多孔板中发酵，待其凝乳后加入等体积的三氯乙酸，混匀，离心，取澄清上清液备用；4）取上清液加到多孔板的A1孔和B1孔中，向A1孔中加入的质量百分比浓度为1%的邻苯二胺，B1孔不加，摇匀后置于黑暗处放置，然后分别加入HCl溶液终止反应，混匀后以不加邻苯二胺的B1孔的溶液作为参比液，用酶标仪在335nm波长下测其OD值，每样至少做3次平行，取其平均值，OD值高于0.37即为丁二酮高产乳酸菌。