一种SD大鼠感染人附红细胞体模型的构建方法
本发明公开了一种SD大鼠感染人附红细胞体模型的构建方法，该方法包括以下步骤：附红细胞体感染率计算及感染情况分度；人附红细胞体分离纯化；瑞氏染液配制；阿氏液配制；瑞士染色；SD大鼠感染人附红细胞体模型的构建；体温测量；临床症状观察；数据处理。本发明可以克服小鼠血量少，不能满足实验过程反复测量某些指标的弊端，具有操作方便的特点。
发明专利
CN201710316889.8
2017-04-28
CN107164230A
2017-09-15
C12N1/02(2006.01)I
内蒙古医科大学
陈瑶;郝雷;白静;刘寰宇;柴珂;刘志跃;邰秀珍;杨殿相;孙勤暖;龚延萍;孙计桃
010110 内蒙古自治区呼和浩特市土默特左旗金山经济开发区
内蒙古;15
一种SD大鼠感染人附红细胞体模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、附红细胞体感染率计算及感染情况分度在血涂片的头、体、尾部各随机选取3个视野，每个视野计数200个红细胞，计数200个红细胞中被附红体感染的红细胞的个数，被感染红细胞的总数与红细胞总数的比值再乘以百分之百，即为该张血片的感染率，每张血片，重复计数三次，并取其平均值作为最终感染率，其中感染划分为3个程度：低于30％为轻度感染，30％‑60％为中度感染，高于60％为重度感染；步骤2、人附红细胞体分离纯化；步骤3、瑞氏染液配制(1)把瑞士染粉1.2g，加入研钵，研成粉末；(2)加入甘油80ml；(2)加入甲醇600ml，常温下放置3个月；步骤4、瑞士缓冲液配置(1)取1％磷酸二氢钾30ml，1％磷酸氢二钠20ml，加蒸馏水至1000ml.(2)调整其PH在6.4‑6.8，121℃高压灭菌30min，封口放4℃冰箱备用；步骤5、阿氏液配制(1)取葡萄糖2.05g，氯化钠0.42g，柠檬酸钠0.80g，加蒸馏水至100ml；(2)将PH调至6.1，过滤后分装；(3)121高压灭菌30min，封口放4℃冰箱备用；步骤6、瑞士染色(1)感染的第1、3、5、7、9、11d上午8：30从大鼠尾静脉采血进行瑞士染色；(2)血涂片平置于染色架上，根据血膜大小滴加适量瑞氏染液，3～5滴，使其迅速盖满血膜；(3)加染液一倍量的缓冲液，用洗耳球对准血涂片，使染液与缓冲液充分混合，染色10min，以固定血片；(4)水洗30s，待自然干燥后，经油浸物镜光学显微镜检查计数其感染率并观察红细胞大小、形态、颜色；步骤7、SD大鼠感染人附红细胞体模型的构建(1)将准备好的人附红细胞体分离纯化液经腹腔注射的方式进行接种；(2)模型组大鼠每只注射100ul分离纯化液，对照组大鼠每只腹腔注射100ul无菌生理盐水注射液；步骤8、体温测量在实验期间的0、3、5、7、9、11天，每天上午八点，用电子体温计测量大鼠体温；步骤9、临床症状观察在实验期间的0、3、5、7、9、11天，每天上午八点在测量相关指标的同时观察大鼠的精神状态、饮食饮水情况、皮肤、巩膜有无黄染、脱毛严重与否；步骤10、数据处理用重复测量方差分析方法分析感染率，检验水准采用a＝0.05，实验结果用均数±标准差进行统计描述，图表中a表示与对照组相比，差异具有统计学意义，P＜0.05；b表示与模型组自身第0天对比，差异具有统计学意义，P＜0.05；c表示与模型组自身第3天对比，差异具有统计学意义，P＜0.05；d表示与模型组自身第5天对比，差异具有统计学意义，P＜0.05；e与模型组自身第7天对比，差异具有统计学意义，P＜0.05。