14个功能性杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIRs基因同步测序分型的方法

摘要：

本发明基于KIR基因组全长序列的结构特点、SNPs多态性分布以及外显子两翼的内含子的长度，制定了科学的PCR扩增策略，设计具有相近退火温度的KIR基因特异性PCR引物56对。每个功能性KIR基因的全部编码区序列分别采用3～5对特异性PCR引物进行扩增；纯化后的PCR扩增产物，采用特异性正向、反向测序引物对每一外显子进行双向测序反应。设计使用的测序引物共计230条。本发明首次建立了适合于高通量化KIR测序分型的方法，全部的14个功能性KIR基因可在同一PCR扩d增条件下进行同步扩增，并且所需时间短；测序分型涵盖了每个功能性KIR基因的全部编码区；所获得的序列无背景信号和杂峰，易于识别和结果判读。在群体遗传学、疾病关联、骨髓移植等领域具有良好的应用前景。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201710284545.3

申请日期：2017-04-25

公开/公告号：CN107058544A

公开/公告日：2017-08-18

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:深圳市血液中心

发明/设计人:邓志辉;甄建新;张国彬

主申请人地址:518020 广东省深圳市福田区泥岗西路梅岗南街

专利代理机构:深圳市世纪恒程知识产权代理事务所 44287

代理人:胡海国

国别省市代码:广东;44

权利要求：

14个功能性杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIRs基因同步测序分型的方法，其特征在于，根据各KIR基因的基因组全长序列的结构、编码区单核苷酸多态性分布特点以及外显子两翼的内含子的长度，制定了科学的PCR扩增策略，每个功能性KIR基因的全部编码区序列分别采用3～5对具有相近退火温度的KIR基因特异性PCR引物进行PCR同步扩增；针对纯化后的PCR扩增产物所含的每一外显子，分别进行正向、反向双向测序，如图1所示。