一种人脂肪间充质干细胞库的构建方法
本发明提供了一种人脂肪间充质干细胞库的构建方法，包括以下步骤：(1)采集脂肪组织，加入生理盐水离心；(2)去油层，清洗脂肪组织；(3)将清洗后的脂肪组织接种于完全培养基中，置于37℃、5％CO<sub>2</sub>条件下进行培养；(4)每隔5‑8天更换一次培养基，待细胞融合度为70‑80％时，用TrypLE<sup>TM</sup> Select消化细胞；(5)传代培养；(6)质量检测；(7)冻存；(8)建库。本发明采用离心法去除油脂和红细胞，没有使用胶原酶消化，可以缩短操作时间，使工艺简单可行；也不会产生大量红细胞，不需要采用红细胞裂解液或低分子肝素钙去除红细胞，不会对人脂肪间充质干细胞造成潜在风险，同时还节约了成本。
发明专利
CN201710034090.X
2017-01-17
CN106754685A
2017-05-31
C12N5/0775(2010.01)I
四川华皓生物科技有限公司
李俊;李升岐;黄海森;徐能飞;石玥;唐梦涛
610200 四川省成都市高新区中和会龙路365号3栋1层附105号
成都正华专利代理事务所(普通合伙) 51229
李蕊
四川;51
一种人脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集供者的脂肪组织，将其剪成1‑5mm<sup>3</sup>大小，然后加入3倍体积的无菌生理盐水，于20℃、2000‑5000/min条件下离心10‑20min；其中，脂肪组织采集部位为腹部、臀部、大腿两侧；(2)离心完毕后，去除上层的油层，收集脂肪组织，然后加入生理盐水清洗1‑2次；(3)将清洗后的脂肪组织接种于完全培养基中，置于37℃、5％CO<sub>2</sub>条件下进行培养；其中完全培养基成分为：无血清培养基、30ng/mL bFGF、10ng/mL胰岛素和体积浓度为2％的GlutaMAX；(4)每隔5‑8天更换一次培养基，待细胞融合度为70‑80％时，用TrypLE<sup>TM</sup> Select消化细胞；(5)传代培养：消化后于2000r/min离心3‑5min，收集细胞，按照1×10<sup>4</sup>‑2×10<sup>4</sup>个细胞/cm<sup>2</sup>的密度接种于T175培养瓶中，然后添加20mL完全培养基传代培养，得脂肪间充质干细胞；(6)针对步骤(5)所得的脂肪间充质干细胞，检测以下项目中的至少一项：细胞活性、无菌检测、细胞表面标志物检测、核型检测、HLA‑ABC/DR配型、遗传病检测、支原体检测、内毒素检测；(7)冻存：将传代培养后符合检测指标的脂肪间充质干细胞按照4×10<sup>6</sup>‑8×10<sup>6</sup>个细胞/mL密度冻存于1mL冻存液中，冻存细胞经程序降温至‑80℃后转入液氮罐中长期保存；(8)建立包含以上信息的脂肪间充质干细胞的数据库，并使该数据库与步骤(7)的冻存细胞进行关联。