一种从冬虫夏草寄主体液中分离纯化冬虫夏草菌的方法及检测液相芯片

摘要：

本发明提供了一种从冬虫夏草寄主体液中分离冬虫夏草菌体的方法，包括以下步骤：将被冬虫夏草菌侵染的寄主昆虫血淋巴通过密度梯度离心分级分离；将冬虫夏草菌体粗提物利用超纯水裂解除去未被分离的血细胞，通过蛋白酶K去除冬虫夏草菌体粗提物冗余蛋白质；利用核酸酶降解残余寄主昆虫的DNA及RNA，分离获得纯化后的冬虫夏草虫菌体；验证获得的冬虫夏草虫菌体是否存在寄主昆虫核酸的污染；将未污染的冬虫夏草虫菌体作为最终产物；该方法填补了从活体寄主昆虫体内获得实时侵染态菌体研究领域的空白。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201611086992.X

申请日期：2016-12-01

公开/公告号：CN106754406A

公开/公告日：2017-05-31

主分类号：C12N1/14(2006.01)I

申请/专利权人:重庆市中药研究院

发明/设计人:鲁增辉;石萍;陈仕江;张德利;贺元川;贺宗毅;涂永勤;邢康康;游华健

主申请人地址:400065 重庆市南岸区南山路34号

专利代理机构:重庆辉腾律师事务所 50215

代理人:王海军

国别省市代码:重庆;85

权利要求：

一种从冬虫夏草寄主体液中分离冬虫夏草菌体的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）将被冬虫夏草菌侵染的寄主昆虫血淋巴通过密度梯度离心分级分离，得到冬虫夏草菌体粗提物；2）将冬虫夏草菌体粗提物利用超纯水裂解除去未被分离的血细胞，通过蛋白酶K去除冬虫夏草菌体粗提物冗余蛋白质；3）利用核酸酶降解残余寄主昆虫的DNA及RNA，分离获得纯化后的冬虫夏草虫菌体；4）从纯化后的冬虫夏草虫菌体中提取DNA和RNA，设计冬虫夏草寄主昆虫特异性引物进行PCR以及RT‑PCR，验证获得的冬虫夏草虫菌体是否存在寄主昆虫核酸的污染；将未污染的冬虫夏草虫菌体作为最终产物。