DNA分子克隆方法

摘要：

本发明涉及一种DNA分子克隆方法，其包括：获得含有ccdB基因的目标载体，所述ccdB基因两端带有SfiI酶切位点、第一接头序列及第二接头序列，所述接头序列为15-30bp，所述接头序列在SfiI酶切位点外围；获得目标基因，所述目标基因经PCR扩增使其两端同样带有接头序列，其序列与上述第一接头序列和第二接头序列分别一致；将所述含有ccdB基因的目标载体与所述目标基因，SfiI酶和Gibson克隆反应液混合反应，再经转化大肠杆菌获得重组克隆。通过本发明的方法可将DNA通过一步反应直接克隆到环状的目标载体，不受目标DNA序列限制，并且零背景。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201510355929.0

申请日期：2015-06-25

公开/公告号：CN104911199A

公开/公告日：2015-09-16

主分类号：C12N15/66(2006.01)I

申请/专利权人:中国热带农业科学院热带生物技术研究所

发明/设计人:言普;周鹏;沈文涛;黎小瑛

主申请人地址:571101 海南省海口市龙华区学院路4号

专利代理机构:广州三环专利代理有限公司 44202

代理人:郝传鑫

国别省市代码:海南;66

权利要求：

一种DNA分子克隆方法，所述方法包括如下步骤：获得含有ccdB基因的目标载体，所述ccdB基因两端分别具有SfiI酶切位点和第一接头序列及第二接头序列，所述第一接头序列和第二接头序列为15‑30bp，所述第一接头序列和第二接头序列分别在SfiI酶切位点两侧；获得目标基因，所述目标基因两端分别带有第三接头序列及第四接头序列，其中所述第一接头序列与第三接头序列序列一样，所述第二接头序列和第四接头序列一样；第一接头序列为ACCTAGGTTCTGGGCCAGGA，第二接头序列为CCTGAGACCGAAGGCCCAGA。将所述含有ccdB基因的目标载体与所述目标基因，SfiI酶和Gibson克隆反应液混合反应。