一种293细胞的大规模悬浮培养方法

摘要：

本发明提供一种293细胞的大规模悬浮培养方法，该方法先在T形组织培养瓶中对293细胞种子进行传代扩增，再转移到搅拌式细胞培养瓶中进一步传代扩增，而后转移到5L容积生物反应器中进行培养，而后将培养得到的细胞转移接种至250L容积生物反应器中进行培养，过程中定期补加新鲜培养基用于维持培养环境适宜细胞生长。本发明提供的技术方案填补了293细胞悬浮培养技术的技术空白，所选培养条件适于293细胞生长，实现了细胞培养密度的最大化，减少了细胞培养的体积，减少了后续的劳动强度，质量均一稳定，生产过程衔接紧密，易操控。本发明在细胞培养和病毒增殖过程中进行补液，保证了细胞增殖所需的营养物质，又提高了营养液的利用率，节约成本。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310439028.0

申请日期：2013-09-23

公开/公告号：CN103468638A

公开/公告日：2013-12-25

主分类号：C12N5/073(2010.01)I

申请/专利权人:天津瑞普生物技术股份有限公司

发明/设计人:夏广欣;吕茂杰;何召庆;王寿山;吴全忠;杨保收;梁武;李守军

主申请人地址:300308 天津市滨海新区空港经济区环河北路76号空港商务园西区W2

专利代理机构:天津滨海科纬知识产权代理有限公司 12211

代理人:李莉华

国别省市代码:天津;12

权利要求：

一种293细胞的大规模悬浮培养方法，其特征在于包括以下步骤：1）取293细胞种子，先在T形组织培养瓶中传代扩增，再转移到搅拌式细胞培养瓶中进一步传代扩增，而后转移到5L容积生物反应器中进行培养，而后将培养得到的细胞用于下级培养的种子细胞；2）将步骤1）得到的用于下级培养的种子细胞的用胰蛋白酶消化液消化，用无血清293SFM II培养基悬浮培养制成细胞悬液，按一定的细胞密度接种到生物反应器调整培养条件为：培养温度在36‑38℃；pH维持在7.0‑7.4之间；溶氧浓度在40%‑50%之间；搅拌速度在100‑135rpm之间，在培养的第1‑3天搅拌速度设置为100‑120rpm，自培养第4天开始在110‑135rpm的范围内逐步提高搅拌速度持续培养；3）培养过程中每24小时补充步骤2）中无血清293SFM II培养基总量20%（v/v）的新鲜无血清293SFM II培养基，直至培养结束。