一种从紫菜酶解产物中分离α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法
一种从紫菜酶解产物中分离α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法,属于生物制品分离纯化技术领域。本发明涉及复配可控酶解成本低廉的末水条斑紫菜,得到α-葡萄糖苷酶抑制剂粗品。该粗品利用SPSepharoseHighPerformance阳离子交换层析、SephadexG-10凝胶层析和MonoQ阴离子交换层析分离纯化,所得对α-葡萄糖苷酶的高抑制活性部分(LGI)用反相高效液相及超高效液相色谱-质谱法分析其纯度和主要组成。LGI对α-葡萄糖苷酶的IC50值为97.36μg/mL,有较好的温度和pH稳定性:80℃水浴7h抑制活性保持在80%以上,在pH3~12的缓冲液中50℃保温2h抑制活性仍保持在87%以上。LGI分子量较小,稳定性好,成本低、应用安全,在医药和食品等领域有较广泛的应用前景。
发明专利
CN201310422683.5
2013-09-17
CN103468774A
2013-12-25
C12P21/06(2006.01)I
江南大学
田亚平;周锋;刘冬冬
214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学生物工程学院
无锡市大为专利商标事务所 32104
时旭丹%刘品超
江苏;32
一种从紫菜酶解产物中分离α‑葡萄糖苷酶抑制剂的方法,其特征在于:步骤为:(1)α‑葡萄糖苷酶抑制剂的提取:以烘干至恒重的末水条斑紫菜粉末为底物,以pH7.0 Na2HPO4‑KH2PO4缓冲液为介质,底物与缓冲液的质量比为1:25~33,沸水浴热处理15 min;加入中性蛋白酶 E/S=8×104 U/g,50℃水解7 h,沸水浴灭酶15 min;调节pH8.5,加入固体氨肽酶 E/S=28 U/g和碱性蛋白酶 E/S=8×104 U/g,50℃水解3 h,沸水浴灭酶15 min;加入乙醇至终浓度为60%,室温静置过夜,8000 r/min离心10 min,上清液为含α‑葡萄糖苷酶抑制剂的混合物;(2)α‑葡萄糖苷酶抑制剂分离纯化:将含α‑葡萄糖苷酶抑制剂的混合物通过活性炭脱色,再将该活性炭脱色液依次经过SP Sepharose High Performance 阳离子交换层析、Sephadex G‑10凝胶层析和Mono Q 阴离子交换层析分离纯化后,得到α葡萄糖苷酶抑制剂。