一种动物细胞灌注培养方法及其专用装置和应用
本发明公开一种方便、快捷、稳定的动物细胞灌注培养方法，同时提供一种实施该方法的专用装置和该方法在生产重组蛋白中的应用。本发明所述方法主要包括：a、选择2-5组带盖离心管，每组离心管内分别放置一种动物细胞贴附载体，同一种类的微型反应器分别设定不同的培养条件；构成一个平行测试组；b、表达重组蛋白的动物细胞按照贴壁依赖性动物细胞常规培养法进行接种、培养；c、筛选出重组蛋白表达浓度平均值较高的平行测试组，以该平行测试组的培养条件作为固化床或篮式反应器灌注培养的优选条件；d、在固化床或篮式生物反应器中进行动物细胞灌注培养工艺放大。本发明所公开的专用装置包括带盖离心管，所述离心管内填充有动物细胞贴附载体；其填充量为离心管体积的20-80%。本发明方法简单、易于操作，筛选效率高、成本低。
发明专利
CN201310355898.X
2013-08-15
CN103396986A
2013-11-20
C12N5/071(2010.01)I
华北制药金坦生物技术股份有限公司
刘伯宁;王英;周兴军;赵宏远;高健;侯丽媛;耿风廷;白燕;张琳洁;张红霞;刘欢欢;董爱华;段宝玲
050035 河北省石家庄市高新技术开发区天山大街106号
石家庄国域专利商标事务所有限公司 13112
白海静
河北;13
一种动物细胞灌注培养方法，其特征在于它包括以下步骤：a、选择2‑5组带盖离心管，每组离心管内分别放置一种动物细胞贴附载体，由此构成不同种类的微型反应器，同一种类的微型反应器分别设定不同的培养液； 将3~5个相同培养条件的同类微型反应器，构成一个平行测试组； b、将表达重组蛋白的动物细胞按照接种量为105~107，分别接种于每一个微型反应器中，然后置于二氧化碳培养箱中，在30~38℃条件下旋转或振荡培养14~60天；其中每隔1~3天用新鲜培养液更换一次培养液；最后一次更换培养液后，再培养1‑3天；c、分别测定每个微型反应器培养液中的目的蛋白表达浓度，筛选出表达浓度平均值较高的平行测试组，该组微型反应器所对应的动物细胞贴附载体、培养液即为筛选出的下一步规模化灌注培养的优选动物细胞贴附载体、培养液；d、将c步工序所筛选出的优选动物细胞贴附载体装入固化床或篮式生物反应器中，将按照c步工序所筛选出的培养液灌注在动物细胞贴附载体上，将表达重组蛋白的动物细胞按照107~1010接种量，接种于培养液中，按照固化床或篮式生物反应器的常规灌注培养条件，进行规模化灌注培养。