一种利用Hoechst33342对猪囊胚进行简易荧光计数的方法

摘要：

本发明一种利用Hoechst33342对猪囊胚进行简易荧光计数的方法，包括以下步骤：(1)、先将猪囊胚于DPBS液中洗涤干净，后放于DT液中透化；(2)、透化完成后放于EH液中脱水、固定、染色；(3)、最后置于甘油，石蜡-凡士林封片，荧光观察并计数。本发明方法具有染色压片后可以很好保持囊胚细胞原始形态，细胞与细胞间界限清晰，可以准确对猪囊胚进行计数；操作简单，基本每一枚囊胚都能很好进行染色，降低宝贵囊胚消耗；所需试剂及器材简单，适用于大部分胚胎生物学实验室，若做成试剂盒使用，可明显提高实验室囊胚质量评定效率的优点。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310344527.1

申请日期：2013-08-09

公开/公告号：CN103397073A

公开/公告日：2013-11-20

主分类号：C12Q1/06(2006.01)I

申请/专利权人:广西大学

发明/设计人:刘帅;石德顺;刘庆友;崔奎青;李红丽;钟俊洁

主申请人地址:530004 广西壮族自治区南宁市大学路100号广西大学动物科学技术学院

国别省市代码:广西;45

权利要求：

一种利用Hoechst33342对猪囊胚进行简易荧光计数的方法，包括以下步骤：(1)、先将猪囊胚于DPBS液中洗涤干净，后放于DT液中透化；(2)、将步骤(1)中透化完成后的猪囊胚放于EH液中，在脱水固定后进行染色；其中EH液中Hoechst33342浓度为45μg/ml；(3)、将步骤(2)中染色后的的猪囊胚置于甘油，用石蜡‑凡士林封片，荧光观察并计数；所述DT液是将99ml DPBS加入0.01g PVA混匀，加入1ml Triton X‑100，摇床200rpm，30min，0.22μm滤器过滤所得；EH液的制备过程为：先将1mg Hoechst33342加入1ml DPBS中，0.22μm滤器过滤后得到母液；然后将9.55ml无水乙醇加入450μL H母液，0.22μm滤器过滤得到EH液。