一种利用原生质体融合技术选育内切型菊粉酶菌株的制备方法

摘要：

本发明涉及一种原生质体融合选育微生物的制备方法，具体涉及一种利用原生质体融合技术选育内切型菊粉酶菌株的制备方法，属遗传技术领域。该制备方法以二种黑曲霉作为出发菌株，经含有菊糖的培养基活化、牛蒡汁液体摇瓶培养后，利用纤维素酶和蜗牛酶水解黑曲霉菌丝细胞的细胞壁，在恒温下振荡，制备原生质体；经原生质体融合后，内切型菊粉酶的酶活比二个出发菌株分别提高了35.08%和48.26%。原生质体融合后再生，经过十代传代实验后，内切型菊粉酶的酶活与再生菌株相比偏差较小，遗传性状稳定。该菌株可用于工业化生产内切型菊粉酶。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310330373.0

申请日期：2013-07-26

公开/公告号：CN103409407A

公开/公告日：2013-11-27

主分类号：C12N15/04(2006.01)I

申请/专利权人:徐州工程学院

发明/设计人:曹泽虹;高兆建;董玉玮

主申请人地址:221111 江苏省徐州市新城区富春路1号

专利代理机构:徐州市三联专利事务所 32220

代理人:何君

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

一种利用原生质体融合技术选育内切型菊粉酶菌株的制备方法，其特征是：选用已保藏的二个黑曲霉菌株作为出发菌株，经含菊糖初筛培养基活化、诱导培养基诱导培养、牛蒡汁液体培养基摇瓶培养后，利用复合酶液水解黑曲霉菌丝体，在28‑32℃下振荡2‑4h，制备原生质体；将二种原生质体溶液各取1ml，加入30%PEG60002ml和0.01mol/L CaCl21ml，使二种原生质体进行融合，再将原生质体混合液加入到再生培养基中，经再生培养、摇瓶液体深层发酵获得内切型菊粉酶发酵液，过滤取上清液，用DNS法测定内切型菊粉酶的酶活。