piggyBac转座子表达载体和转基因猪及其构建方法

摘要：

本发明公开了一种piggyBac转座子表达载体和转基因猪及其构建方法，属于基因工程领域。所述表达载体是通过将含有loxP-Neo/EGFP基因表达盒的融合片段连接到pCyL50质粒上构建得到的。将该载体导入猪的基因组，并采用体细胞核移植技术生产出转基因猪。本发明的表达载体具有piggyBac转座子，极大地提高了转基因效率，且将普通质粒串联重组的转基因整合模式变成了单位点单拷贝整合，更好的模拟生物基因的内环境。本发明的转基因猪的构建方法为各种转基因动物的制备提供了一条新的思路，同时也对转基因动物生物模型的制作提供一种简便高效的方法。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310320502.8

申请日期：2013-07-26

公开/公告号：CN103468732A

公开/公告日：2013-12-25

主分类号：C12N15/66(2006.01)I

申请/专利权人:吴珍芳%李紫聪

发明/设计人:徐志谦;吴珍芳;邹娴;李紫聪;刘德武;张献伟;曾芳;周荣;曾海玉

主申请人地址:510642 广东省广州市天河区华南农业大学动物科学学院新楼

专利代理机构:北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246

代理人:龚燮英

国别省市代码:广东;44

权利要求：

一种piggyBac转座子表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、以SEQ ID NO:5的质粒为模板，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2为引物，PCR扩增出序列为SEQ ID NO:3的含有loxP‑Neo/EGFP基因表达盒的融合片段；(2)、分别用SalI酶切步骤1的loxP‑Neo/EGFP基因表达盒的融合片段与质粒pCyL50，纯化，连接，转化感受态细胞，挑选单克隆菌落进行扩大培养，提取阳性克隆的质粒，SalI进行酶切鉴定，得到piggyBac转座子表达载体pPB‑CMV‑Neo/EGFP，序列为SEQ ID NO:4。