一种产L-谷氨酸氧化酶重组菌株的构建方法及其应用

摘要：

本发明阐述了一种产L-谷氨酸氧化酶重组菌株的构建方法及其应用，属于基因工程与酶学品领域，将重组产生的谷氨酸氧化酶包涵体进行蛋白变性、复性和浓缩，使30％的蛋白包涵体恢复活性，通过对重组酶的酶学性质研究，发现重组酶最适pH8.5，最适温度35℃，Mn2+可以使酶比活力提高20％以上，而外源添加FAD对酶活力没有影响；结合酶学特征，将重组酶添加到含有20g/L的谷氨酸钠pH8.5的缓冲液中，35℃转化12h可以生成8.3g/L的α-酮戊二酸。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310309739.6

申请日期：2013-07-23

公开/公告号：CN103388002A

公开/公告日：2013-11-13

主分类号：C12N15/76(2006.01)I

申请/专利权人:江南大学

发明/设计人:刘立明;牛盼清;董晓翔

主申请人地址:214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号江南大学国家重点实验室

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

一种产L‑谷氨酸氧化酶重组菌株的构建方法，其特征如下：1)通过构建重组质粒，将谷氨酸氧化酶基因表达于E.coli BL21中构建重组菌株，该菌株具有产生L‑谷氨酸氧化酶的能力；2)菌株产生的L‑谷氨酸氧化酶是包涵体，没有蛋白质活性。