一种利用枯草芽孢杆菌表达外源蛋白的方法

摘要：

本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌表达外源蛋白的方法。通过构建融合蛋白SUMO-CBF和SUMOprotease1枯草芽孢杆菌分泌表达载体，实现表达并纯化融合蛋白SUMO-CBF和SUMOprotease1；用重组表达得到的SUMOprotease1切割重组表达得到的SUMO-CBF释放重组抗菌肽CBF；通过亲和层析和阳离子交换纯化得到不含内毒素的抗菌肽CBF。纯化产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等均有显著的抑制作用。本发明为使用SUMO技术在枯草芽孢杆菌表达系统中重组表达阳离子抗菌肽提供了可能；融合蛋白不易形成包涵体，直接分泌至胞外，并且重组阳离子抗菌肽不含内毒素，省去了大量下游的纯化工作；尤其是利用同一个系统纯化外源蛋白，相辅相成，减少了外来污染物或者不纯物质的引入。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310308517.2

申请日期：2013-07-23

公开/公告号：CN103421834A

公开/公告日：2013-12-04

主分类号：C12N15/75(2006.01)I

申请/专利权人:浙江大学

发明/设计人:汪以真;栾超

主申请人地址:310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号

专利代理机构:杭州求是专利事务所有限公司 33200

代理人:林松海

国别省市代码:浙江;33

权利要求：

一种利用枯草芽孢杆菌表达外源蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1）将外源蛋白基因插入枯草芽孢杆菌分泌表达载体得到外源蛋白枯草芽孢杆菌分泌表达载体；2）外源蛋白枯草芽孢杆菌分泌表达载体在枯草芽孢杆菌中高效表达，分泌外源蛋白；3）将步骤2)分泌的外源蛋白经亲和层析纯化外源蛋白。