一种动物血液中超氧化物歧化酶提取技术新工艺
本发明涉及一种动物血液中超氧化物歧化酶提取技术新工艺,其特征在于,所述工艺包括以下步骤:(1)分离血球;(2)除血红蛋白;(3)热变性,上清液加热到65℃,保温10min,然后迅速冷却到室温,3000r/min离心20min,弃去沉淀物,收集上清液;(4)沉淀,清液在盐冰浴中冷却,然后在-5℃以下的操作温度下,加入1.5倍量预冷丙酮,边加边搅拌均匀,即有白色沉淀产生;(5)SOD的纯化,采用热变性—等电点—丙酮分级沉淀合用的方法,首先将SOD粗提液先在55℃下处理15min,然后调节pH值至其等电点3~4,最后加入终体积为1.0%的丙酮,收集沉淀。向沉淀中加入去离子水,溶液即为SOD提纯液;采用DEAESepha-dexA-50层析柱进行纯化,纯化产物即为SOD精品液。
发明专利
CN201310307979.2
2013-07-22
CN103397003A
2013-11-20
C12N9/02(2006.01)I
南京宝迪农业科技有限公司
龙峥;于福满;王小乔;姜无边
211800 江苏省南京市浦口区龙港路21号
南京众联专利代理有限公司 32206
杜静静
江苏;32
一种动物血液中超氧化物歧化酶提取技术新工艺,其特征在于,所述工艺包括以下步骤,(1)分离血球 取新鲜动物血,加入到3.8%柠檬酸三钠抗凝液中,新鲜动物血与抗凝液的比例为3:1,轻轻搅拌均匀,4 000r/min离心20min,收集红血球; (2)除血红蛋白 红血球用3倍体积生理盐水洗涤,4 000r/min离心20min,重复三次,然后向洗净的红血球加入1~1.1倍体积去离子水,搅拌溶血30min,再向溶血液中分别缓慢加入0.25倍体积的预冷95%乙醇和0.15倍体积的预冷氯仿,剧烈搅拌15min左右,静置1h,然后 4 000r/min离心20min除去变性血红蛋白沉淀,取清液,过滤,收集滤液; (3)热变性 上清液加热到65℃,保温10min,然后迅速冷却到室温,3 000r/min离心20min,弃去沉淀物,收集上清液; (4)沉淀 清液在盐冰浴中冷却,然后在‑5℃以下的操作温度下,加入1.5倍量预冷丙酮,边加边搅拌均匀,即有白色沉淀产生,静置2~3min,迅速抽滤,弃去滤液得肉色沉淀;沉淀物用少量蒸馏水溶解,4 000r/min离心20min,除去不溶物,用pH7.6的 2.5mmol/L K2HPO4‑KH2PO4缓冲液透析,即得粗SOD溶液;(5)SOD的纯化,采用热变性—等电点—丙酮分级沉淀合用的方法,首先将SOD粗提液先在55℃下处理15min,然后调节pH值至其等电点3~4,最后加入终体积为1.0%的丙酮,收集沉淀;向沉淀中加入去离子水,溶液即为SOD提纯液;采用DEAE Sepha‑dexA‑50层析柱进行纯化,纯化产物即为SOD精品液。