一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法

摘要：

本发明涉及一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法，属于繁殖生物学领域。本发明包括猪卵母细胞的去脂、孤雌激活、成纤维细胞的分离和连续的体细胞核移植；将猪去脂后的成熟卵母细胞进行孤雌激活获得孤雌胚胎，移植到代孕母猪体内并获取25－29日龄成活孤雌胎儿，建立猪孤雌胎儿成纤维细胞系，并将其作为最初供体细胞，利用体细胞核移植技术进行连续克隆获得猪的孤雌生殖个体，此技术克服了猪的孤雌生殖胚胎在体内发育至30天便停止发育的情况，成功延长猪的孤雌胚胎在体内的发育时间，并最终获得成活的孤雌克隆猪。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310295393.9

申请日期：2013-07-15

公开/公告号：CN103343142A

公开/公告日：2013-10-09

主分类号：C12N15/877(2010.01)I

申请/专利权人:云南农业大学

发明/设计人:魏红江;赵红业;赵鲁

主申请人地址:650201 云南省昆明市盘龙区黑龙潭云南农业大学

国别省市代码:云南;53

权利要求：

一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法，其特征在于，所述的生产孤雌生殖克隆猪的方法按照下面步骤进行：第一步、获得猪孤雌胎儿成纤维细胞；对猪成熟卵母细胞进行高速离心，用显微操作技术去除脂肪颗粒，然后对其进行孤雌激活获得孤雌胚胎，移植到代孕母猪体内，取25－29日龄成活孤雌胎儿，建立猪孤雌胎儿成纤维细胞系；第二步、通过第一代克隆获得猪孤雌生殖的克隆胎儿成纤维细胞；首先，将分离的猪孤雌胎儿成纤维细胞作为供体细胞，通过体细胞核移植技术进行第一代体细胞核移植，将重构胚移植到代孕母猪体内发育，手术获取能发育超过成活35日龄的第一代孤雌生殖的克隆胎儿，并分离培养猪孤雌生殖的克隆胎儿成纤维细胞；第三步、通过第二代甚至第三代、第四代克隆最终获得成活的孤雌生殖克隆猪；将第一代克隆获得的猪孤雌生殖的克隆胎儿成纤维细胞作为供体细胞，通过体细胞核移植技术进行第二代体细胞核移植，将重构胚胎移植到代孕母猪体内发育，获得第二代孤雌生殖的克隆猪。