一种利用黄杆菌高效生产维生素K2的方法

摘要：

本发明公开了一种利用黄杆菌高效生产维生素K2的方法。将黄杆菌原始菌株在培养基上活化后，采用低能离子束及低温等离子体复合诱变方式选育高产菌株，经过含维生素K2类似物平板初筛及摇瓶发酵复筛后，高产菌株发酵单位提高50～100%；在黄杆菌发酵过程中通过添加表面活性剂，使胞内维生素K2溶至胞外，维生素K2产量提高50～200%。本发明能够能够极大的提高维生素K2发酵水平，实现高效生物合成维生素K2，为实现维生素K2的大规模工业化发酵提供了可能，使用方便。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310280268.0

申请日期：2013-07-04

公开/公告号：CN103290077A

公开/公告日：2013-09-11

主分类号：C12P7/66(2006.01)I

申请/专利权人:中国科学院合肥物质科学研究院

发明/设计人:郑之明;刘艳;王鹏;王丽;赵根海;贡国鸿;刘会;宋均营

主申请人地址:230000 安徽省合肥市蜀山湖路350号

专利代理机构:安徽汇朴律师事务所 34116

代理人:胡敏

国别省市代码:安徽;34

权利要求：

一种利用黄杆菌高效生产维生素K2的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将黄杆菌原始菌株在培养基上活化；（2）将黄杆菌菌液涂布于无菌平皿上，风干，进行N+或Ar+离子注入，洗脱后移至含维生素K2类似物的初筛平板培养基上培养，挑选生长旺盛菌落，作为初筛菌落，将初筛菌落转接摇瓶发酵培养基中发酵，挑选维生素K2产量高菌株作为复筛结果，并移至斜面培养基保藏；（3）将上述高产菌株菌液，涂布于无菌平皿上，风干，进行低温等离子体照射，洗脱后移至初筛平板培养基上培养，挑选生长旺盛菌落，作为初筛菌落，将初筛菌落转接摇瓶发酵培养基中发酵，挑选维生素K2产量高菌株作为复筛结果，并移至斜面培养基保藏，重复步骤2～4次，获得维生素K2高产黄杆菌，发酵单位提高50～100%；（4）将黄杆菌菌株接入种子培养基中培养，按接种量5～10%接入发酵培养基，在发酵培养基中添加0.1～5%表面活性剂，在30～37℃培养3天，胞内维生素K2溶至胞外，维生素K2产量提高50～200%。