一种PEDV和TGEV双重RT-PCR检测方法及寡核苷酸引物对

摘要：

本发明涉及一种用于检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）的双重RT-PCR方法及寡核苷酸引物对。参照GenBank收录的PEDV CV777株（AF353511.1）核蛋白（N）基因序列和TGEV Miller M60株（DQ811786.2）纤突蛋白（S）基因序列，分别设计两对特异性引物，根据设计的引物，探索最佳反应体系和反应条件，在建立单项RT-PCR检测方法的基础上，建立双重RT-PCR方法，并进行特异性试验、敏感性试验、重复性试验。用该方法对85份猪腹泻临床样本进行检测，并对其中的36份临床样本同时进行PEDV和TGEV抗原检测卡检测。结果表明，建立的双重RT-PCR方法敏感性高、特异性强，能快速地检测PEDV和TGEV。本研究所建立的双重RT-PCR检测方法具有很好的应用性，能够用于猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的检测。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310273061.0

申请日期：2013-07-01

公开/公告号：CN103320537A

公开/公告日：2013-09-25

主分类号：C12Q1/70(2006.01)I

申请/专利权人:青岛农业大学

发明/设计人:单虎;王述柏;韩先杰;秦志华;黄娟;靳继惠;张洪亮

主申请人地址:266109 山东省青岛市城阳区长城路700号

国别省市代码:山东;37

权利要求：

一种用于检测PEDV和TGEV的双重RT‑PCR方法，其特征在于：该方法是针对GenBank上已发表的PEDV N蛋白基因和TGEV S蛋白基因保守序列，设计合成两对引物，选取最佳退火温度和反应体系，在建立单项RT‑PCR检测方法的基础上，建立PEDV和TGEV双重RT‑PCR检测方法。