一种制备谷氨酸脱羧酶的方法
本发明涉及一种制备谷氨酸脱羧酶的方法,步骤如下:(1)含谷氨酸脱羧酶的微生物细胞培养、离心收集细胞、细胞破碎,调细胞破碎液的pH值和离子强度;(2)配制反胶团萃取体系溶液和反萃取水相溶液;(3)利用反胶团进行萃取;(4)进行反萃取,得到含谷氨酸脱羧酶的水溶液;(5)超滤膜过滤浓缩,截留液冷冻干燥,制得谷氨酸脱羧酶产品。本发明可实现谷氨酸脱羧酶制备的连续化、规模化,并且酶的制备工艺简便,生产周期短,酶活力回收率高,萃取剂可循环使用,谷氨酸脱羧酶的生产成本较低。
发明专利
CN201310244021.3
2013-06-19
CN103305495A
2013-09-18
C12N9/88(2006.01)I
齐鲁工业大学
董永胜
250353 山东省济南市长清区大学路3501号
济南金迪知识产权代理有限公司 37219
朱家富
山东;37
一种利用反胶团萃取体系制备谷氨酸脱羧酶的方法,步骤如下:(1)将含谷氨酸脱羧酶的微生物细胞进行培养,得细胞培养液,离心,制得湿菌体细胞,将湿菌体细胞重悬于去离子水中,制得细胞悬浮液,破碎细胞,得到细胞破碎液;调细胞破碎液的pH值为5.5~7.0,然后加入无机盐调节溶液的离子强度为0.10~0.20mol/L,制得含有谷氨酸脱羧酶的细胞破碎溶液;(2)将助溶剂加入到有机溶剂中,助溶剂与有机溶剂的体积比为1:(4~10),摇匀,再加入表面活性剂,使表面活性剂在有机溶液中的浓度为100~250mmol/L,混合均匀,制得反胶团体系溶液;将缓冲剂加入到去离子水中配制0.10~0.20mol/L的缓冲溶液,再将反萃取助剂加入到缓冲溶液中,使反萃取助剂在缓冲溶液中的质量浓度为5~30wt%,摇匀,然后加入无机盐调节溶液的离子强度为1.0~2.0mol/L,制得反萃取水相溶液;(3)将步骤(1)制得的含有谷氨酸脱羧酶的细胞破碎溶液加入到步骤(2)制得的反胶团体系溶液中,反胶团体系溶液与细胞破碎溶液的体积比为1:(1~10),混合均匀,萃取操作温度为10~25℃,离心分相,取有机相,制得含有谷氨酸脱羧酶的反胶团有机溶液;(4)向步骤(3)制得的含有谷氨酸脱羧酶的反胶团有机溶液中加入步骤(2)制得的反萃取水相溶液,反萃取水相溶液与含有谷氨酸脱羧酶的反胶团有机溶液的体积比为1:(1~10),混合均匀,反萃取操作温度为30~40℃,离心分相,制得含有谷氨酸脱羧酶的水溶液;(5)将步骤(4)制得的含有谷氨酸脱羧酶的水溶液用超滤膜过滤浓缩,收集截留液,冷冻干燥,制得谷氨酸脱羧酶。