一种免疫缺陷小鼠模型的建立方法

摘要：

本发明公开的免疫缺陷小鼠模型的建立方法，包括如下步骤：(1)构建使小鼠细胞中免疫相关基因功能丧失的DNA；(2)步骤(1)构建出的DNA纯化后经逆转录酶经体外转录为mRNA；(3)mRNA纯化并冻存于RNAase free的超纯水中；(4)在SPF级别饲养条件下，饲养受孕雌鼠和假孕雌鼠；(5)从步骤(4)的受孕雌鼠腹腔中获取输卵管，收集受精卵；(6)用显微注射法将步骤(3)获得的mRNA注射进步骤(5)得到的受精卵的原核内；(7)将步骤(6)获得的受精卵移植入步骤(4)获得的假孕雌鼠体内，假孕雌鼠开始培育第二代；(8)建立稳定的缺陷小鼠品系。本发明的优点，能够得到完全对异体移植无免疫排斥作用的小鼠模型用于试验。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310229629.9

申请日期：2013-06-09

公开/公告号：CN103409468A

公开/公告日：2013-11-27

主分类号：C12N15/89(2006.01)I

申请/专利权人:中国科学院广州生物医药与健康研究院

发明/设计人:李鹏;刘志新;蒋志武;王素娜;尹爱兰;钟梅;贾蓓

主申请人地址:510530 广东省广州市萝岗区科学城开源大道190号

专利代理机构:北京东正专利代理事务所(普通合伙) 11312

代理人:蔡仲德

国别省市代码:广东;44

权利要求：

一种免疫缺陷小鼠模型的建立方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)利用TEALN基因敲除术，构建使小鼠细胞中免疫相关基因功能丧失的DNA；(2)将步骤(1)构建出的DNA纯化，纯化后使用SP6逆转录酶经体外转录为mRNA；(3)将步骤(2)得到的mRNA纯化，并冻存于RNAase free的超纯水中，以备显微注射之用；(4)在SPF级别饲养条件下，饲养受孕雌鼠和假孕雌鼠；(5)从步骤(4)的受孕雌鼠腹腔中获取输卵管，用质量浓度为0.9％的生理盐水清洗后，放在显微镜下观察，挑取并收集受精卵；(6)用显微注射法将步骤(3)获得的mRNA注射进步骤(5)得到的受精卵的原核内，受精卵将mRNA翻译成蛋白，蛋白结合到免疫相关基因，破坏免疫相关基因序列，从而使免疫相关基因的功能丧失。(7)将步骤(6)获得的受精卵移植入步骤(4)获得的假孕雌鼠体内，假孕雌鼠开始培育第二代；(8)将步骤(7)获得的免疫缺陷小鼠自交，扩大种群数量，建立稳定的缺陷小鼠品系。