一种利用TALEN技术的高效定点转基因方法

摘要：

本发明涉及一种利用TALEN技术的高效定点转基因方法，属于分子生物学领域；利用TALEN技术在生物体基因组中的特定位置设计出具有特异性序列TALEN靶点、构建TALEN质粒，同时，构建外源基因质粒；再将TALEN质粒和外源基因共同转染受体细胞，然后，在受体细胞基因组待整合的位置上切开一个口；外源基因就会在受体细胞基因组的切口处将外源基因序列自动插入。本发明实现了外源基因在基因组上定点整合，本方法操作简单，可控性高，实用性强。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310209089.8

申请日期：2013-05-31

公开/公告号：CN103266122A

公开/公告日：2013-08-28

主分类号：C12N15/63(2006.01)I

申请/专利权人:云南农业大学

发明/设计人:魏红江;申友锋;赵红业;李鸿辉;卿玉波;潘伟荣;富国文

主申请人地址:650201 云南省昆明市盘龙区黑龙潭云南农业大学

国别省市代码:云南;53

权利要求：

一种利用TALEN技术的高效定点转基因方法，其特征在于：高效定点转基因方法的具体操作过程按照下面步骤进行；第一步、根据需整合到受体细胞基因组上的位置而设计出具有特异性的序列TALEN靶点；第二步、根据设计出的TALEN靶点构建出TALEN质粒，同时，构建外源基因质粒；第三步、将TALEN质粒和外源基因共同转染受体细胞，TALEN质粒表达的蛋白会在受体细胞基因组TALEN靶点的位置上切开一个口；外源基因会在切口处整合进入受体基因组；第四步、对转染后的受体细胞进行稀释培养，获得细胞克隆，鉴定外源基因在受体细胞基因组上整合的细胞克隆，挑选出符合整合位置要求的阳性细胞克隆，以备后续试验使用。