一种促进三孢布拉氏霉菌中番茄红素合成的方法
本发明涉及一种促进三孢布拉氏霉菌中番茄红素生物合成的方法。该方法的具体操作步骤如下:(1)在平板上分别培养三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)(+)、(-)菌株,得到孢子悬液;(2)将三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)(+)、(-)菌株分别接种到装有种子培养基的锥形瓶中;(3)将培养好的1瓶正菌、4瓶负菌种子液混合均匀,接入发酵培养基中发酵;(4)在发酵开始后的24-48小时加入NAD+前体物质继续培养至84小时结束。本发明的方法操作简单、大幅度提高了番茄红素的产量、降低了生产成本,可应用于番茄红素的工业化生产。
发明专利
CN201310202600.1
2013-05-28
CN103276019A
2013-09-04
C12P5/02(2006.01)I
北京化工大学
袁其朋;胡仙妹
100029 北京市朝阳区北三环东路15号
北京思海天达知识产权代理有限公司 11203
刘萍
北京;11
一种促进三孢布拉氏霉菌中番茄红素合成的方法,其特征在于步骤如下:1)平板培养:取去皮土豆20g,加入200ml去离子水煮沸并保持20min;冷却后过滤,取过滤后的清液加2g葡萄糖和2g琼脂;115℃下灭菌30 min,冷却降温后即可制得PDA培养基;取三孢布拉氏霉菌Blakeslea trispora(+)、(‑)菌株孢子悬液分别涂布于PDA平板上,于28℃恒温培养箱中培养3‑5天,4℃保存;2)种子培养:将40g玉米淀粉、20g葡萄糖、50g玉米浆加入到烧杯中,用去离子水定容至1000ml,于95℃下糊化40min;冷却后加入1.5g磷酸二氢钾、 0.1g七水硫酸镁,0.01g维生素B1,混匀后用氢氧化钠溶液调pH至6.5,分装于250ml锥形瓶中,115℃下灭菌30 min;从三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)(+)、(‑)菌株平板中用接种环挑取一环的正菌、负菌,分别接种到含有50ml种子培养基的250 ml锥形瓶中,于26‑28℃,180 ‑200rpm条件下避光培养36‑40小时;3)发酵培养:将30g葡萄糖、78g大豆饼粉、1.5g磷酸二氢钾、0.5g七水硫酸镁、1g二丁基羟基甲苯加入到烧杯中,加入去离子水定容至1000ml,配制成发酵液,用氢氧化钠溶液调pH至7.5,分装于500ml锥形瓶中, 115℃下灭菌30 min;将培养好的三孢布拉氏霉菌Blakeslea trispora(+)、(‑)菌株种子液按照正菌1瓶、负菌4瓶的比例混合均匀,以10%v/v的接种量接入到装有50ml发酵培养基的500ml锥形瓶中,加入烟酸或烟酰胺,于26‑28℃,200‑220rpm条件下避光培养84小时;在发酵开始后36小时加入250µL体积浓度为10%的阻断剂烟碱;发酵84小时后,用去离子水清洗收获的菌体并用纱布过滤,将湿菌体置于真空干燥箱中,45℃、0.08Mpa条件下干燥处理24小时得到干菌体;烟酸或烟酰胺的加入量为0.3‑0.5g/l起始发酵液体积;加入的时间是发酵开始后24‑48小时。