一种利用重组Bacillus subtilis克隆表达粘质沙雷氏菌脂肪酶的方法

摘要：

一种利用重组Bacillus subtilis克隆表达粘质沙雷氏菌脂肪酶的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得粘质沙雷氏菌中脂肪酶(lipA)的基因扩增，然后利用pMA-5质粒，首次实现了该基因在模式菌株枯草芽孢杆菌168中的过量表达。本发明首次构建产粘质沙雷氏菌脂肪酶的枯草芽孢杆菌工程菌株，对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现经过培养基成分及培养条件的优化之后脂肪酶活为98.6U/mL，是出发菌8.57U/mL的12倍，脂肪酶的活力较出发菌株有了显著提高。本发明为微生物发酵法生产脂肪酶的工业化提供了积极的指导作用并且可用于食品工业领域中。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310196207.6

申请日期：2013-05-24

公开/公告号：CN103243117A

公开/公告日：2013-08-14

主分类号：C12N15/75(2006.01)I

申请/专利权人:江南大学

发明/设计人:饶志明;司冠儒;徐美娟

主申请人地址:214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号江南大学

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

一种重组表达载体pMA5‑lipA，其特征是：通过PCR技术获得来源于粘质沙雷氏菌的脂肪酶(lipA)基因，与克隆载体pMD‑18T相连，获得该基因的大量克隆，经双酶切，片段纯化后与表达载体pMA5连接。