一种从猪皮中提取I型胶原的方法
本发明公开了一种从猪皮中提取I型胶原的方法，该方法首先将新鲜猪皮在-20℃以下冷冻后切片，切片厚度小于1mm，采用匀浆法将猪皮制成匀浆，使用有机溶解萃取后在40.5±1℃条件下进行酶解以去除非I型胶原，根据不同类型胶原的热稳定性差异进行选择性酶解，离心法去除酶解后的多肽，收集不溶性的固体，多次洗涤，干燥后获得猪皮I型胶原。制备的猪I型胶原纯度超过99%且保持三螺旋的天然结构。该方法具有操作简单，制备出的I型胶原纯度高和随机降解率低等优点。
发明专利
CN201310173789.6
2013-05-13
CN103215334A
2013-07-24
C12P21/06(2006.01)I
河北考力森生物科技有限公司
王云松;吴士龙
057450 河北省邱县经济开发区森北路1号河北考力森生物科技有限公司
中国商标专利事务所有限公司 11234
曾海艳
河北;13
一种从猪皮中提取I型胶原的方法，其特征在于提取方法包括以下步骤：（1）称重：取新鲜的猪皮，准确称重，其重量作为后续处理步骤的计量依据。（2）清洗：使用2?3倍猪皮重量的清水在常温下将新鲜的猪皮直接清洗，去除附着物。（3）冷冻：将猪皮在?20℃以下冷冻24?36小时。（4）切片：使用刀具在猪皮平面的垂直方向上将猪皮切成片状，切片厚度小于1mm。（5）打浆：向猪皮切片中加入2?4倍重量的清水，均匀悬浮后将其冷冻到0?4℃，使用匀浆机或胶体磨将切片后的猪皮处理成浆状。（6）第一次萃取：向匀浆中加入1?2倍匀浆液体积的正己烷、氯仿或石油醚等有机溶剂，在室温下震荡2?4小时，将其转移到分液器中萃取，收集水溶液；（7）第二次萃取：向步骤（6）收集的水溶液总加入1?2倍匀浆液体积的正己烷、氯仿或石油醚等有机溶剂，在室温下震荡2?4小时，将其转移到分液器中萃取，收集水溶液。（8）过滤：使用孔径为5微米的微滤膜过滤水溶液，收集透过液；（9）加盐：向步骤（8）获得的透过液中加入NaCl，控制NaCl的浓度为0.2?1.0mol/L，加入磷酸氢二钠调节pH至7.5?8.5。（10）控温：将步骤（9）获得的溶液温度准确控制在40.5±1℃。（11）酶解：向步骤（10）溶液中加1/50?1/20倍猪皮重量的蛋白酶，在40.5±1℃条件下酶解16?24小时，以去除非I型胶原。（12）离心：将酶解后的溶液在12000?16000r/m条件下离心，收集沉淀物。（13）洗涤：使用2?4倍沉淀物重量的去离子水将步骤（12）获得的沉淀物悬浮，离心后收集沉淀物，重复上述过程两次。（14）干燥：将洗涤后的沉淀物在?20℃冷冻，置于冷冻干燥机内干燥，干燥后的粉末即为I型胶原蛋白。