一种乳酸菌IIa类抗菌肽的PCR筛选方法
一种乳酸菌IIa类抗菌肽的PCR筛选方法,涉及一种抗菌肽的筛选方法。本发明是要解决传统的抗菌肽筛选方法存在的敏感性低的技术问题。本发明的方法为:一、IIa类抗菌肽聚类分析与筛选引物设计,PCR产物的获得;二、PCR产物载体连接与测序,获得乳酸菌IIa类抗菌肽。本发明PCR筛选的抗菌肽的基因序列与enterocin A的编码基因的同源性为99%,敏感性高。本发明应用于抗菌肽的筛选领域。
发明专利
CN201310150907.1
2013-04-26
CN103276058A
2013-09-04
C12Q1/68(2006.01)I
哈尔滨工业大学
崔艳华;曲晓军;陈章庭;张超;王超;丁忠庆
150001 黑龙江省哈尔滨市南岗区西大直街92号
哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109
高会会
黑龙江;23
一种乳酸菌IIa类抗菌肽的PCR筛选方法,其特征在于乳酸菌IIa类抗菌肽的PCR筛选方法是按以下步骤进行的:一、根据Enterococcus faecium中编码抗菌肽enterocin A的entA基因33‑51位点和123‑142位点的序列设计一对种属特异性引物Group‑5F和Group‑5R,然后对乳酸菌基因组DNA进行PCR扩增,得到PCR扩增产物;二、PCR产物采用凝胶回收试剂盒回收,将胶回收后的目的DNA,按照零背景快速连接试剂盒说明书操作,连接至载体pZeroblunt上,经菌体PCR鉴定确认是重组pZeroblunt质粒的阳性克隆菌时,在Ep管中加入200~300μL的重组pZeroblunt质粒的阳性克隆菌菌液,做好标记及密封,送到上海英俊生物有限公司,正反两个方向同时测序,然后将所得测序结果进行拼接,之后在NCBI数据库中进行比对,若PCR片段与Enterococcus faecium E5、E9等菌株中编码抗菌肽enterocin A的基因同源性达到99%,则为乳酸菌IIa类抗菌肽;其中,步骤一中Group‑5F的核苷酸序列为:5′‑GACACAACTTATCTATGGGG‑3′;Group‑5R的核苷酸序列为:5′‑TACAAGTAGTTGCCTTGGCC‑3′。