一种MDCK细胞改良传代方法
一种MDCK细胞改良传代方法。它是在MDCK细胞（培养瓶规格：T-75）传代消化过程中，通过3次更换消化液(EDTA-胰酶)，前2次消化液作用时间为1min，第3次消化液作用时间因细胞消化状态而定，每次加入1mL消化液，使消化液作用温度始终保持在37℃最佳消化温度；加入消化液前要用Hank’s平衡盐溶液清洗细胞、终止消化时弃掉消化液后要加入0.2mL的胎牛血清，其目的是为了进行消化液和胎牛血清的中和作用，保护细胞；本发明累计消化时间为3～6min。与流感监测方案相比，每消化一瓶（培养瓶规格：T-75）MDCK细胞节省有效工作时间9～11min,节约消化液8mL。
发明专利
CN201310142688.2
2013-04-24
CN103215219A
2013-07-24
C12N5/071(2010.01)I
哈尔滨市疾病预防控制中心
任莉娜;张崇华;杜溪乔
150056 黑龙江省哈尔滨市道外区卫星路30号
哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109
高会会
黑龙江;23
一种MDCK细胞改良传代方法，其特征在于MDCK细胞改良传代方法是按照以下步骤进行的：一、取培养瓶中培养的单层MDCK细胞，弃去培养瓶中培养液，用Hank’s平衡盐溶液清洗MDCK细胞，弃掉洗液；二、向步骤一培养瓶中清洗后的MDCK细胞加入1mL预热的胰酶，放入37℃温箱培养1min，弃掉胰酶；三、重复步骤二操作1次；四、向步骤三处理的MDCK细胞中加入1mL预热的胰酶，放入37℃温箱培养1～4min，期间显微镜下观察细胞状态，若细胞出现明显细胞间隙时终止消化过程，弃掉胰酶；五、向步骤四处理后的MDCK细胞中加入0.2mL胎牛血清中和残余胰酶的活性，再补入8mL的细胞培养液，混匀制成细胞悬液分装至T?25细胞瓶中，在37℃温箱培养，隔天更换细胞培养液，待MDCK细胞长成单层后停止培养，即完成MDCK细胞改良传代；其中，步骤五中所述的细胞培养液为：每1mL细胞培养液含有0.84mL的MEM、0.11mL的胎牛血清、0.012mL的L?谷氨酰胺、0.01mL的青链霉素和0.015mL的羟乙基哌嗪乙硫磺酸。