一种利用棕绳固定化细胞连续制备β-环糊精的方法
一种利用棕绳固定化细胞连续制备β-环糊精的方法,属于β-环糊精生产技术领域。本发明用棕绳编织成棕帘再经处理过,将环糊精糖基转移酶CGTase产生菌ATCC21783固定在棕帘上,摇瓶生产CGTase,每隔2-3天将棕帘取出,用生理盐水清洗,洗去棕帘上的衰老退化菌落,重新投放到新鲜的培养基中继续培养;发酵产生的CGTase按照工业化步骤用于β-环糊精生产。棕帘固定化细胞使CGTase连续化产生,进而实现β-环糊精的连续化生产,该过程可持续一个月以上。本发明首次采用棕绳这一天然易得材料作为固定化基质,用于固定化CGTase产生菌,固定化过程简单,连续化生产效果显著;与现有β-环糊精制备工艺相比,缩短菌种产酶周期,简化β-环糊精制备工艺,提高生产效率。
发明专利
CN201310139832.7
2013-04-19
CN103194507A
2013-07-10
C12P19/18(2006.01)I
江南大学
金征宇;岳艳;王金鹏;周星;焦爱权;王亚敏;赵建伟;徐学明;谢正军;田耀旗
214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学
无锡市大为专利商标事务所 32104
时旭丹%刘品超
江苏;32
一种利用棕绳固定化细胞连续制备β?环糊精的方法,其特征在于以棕绳固定化细胞,实现环糊精糖基转移酶CGTase连续培养,从而实现β?环糊精的连续化制备,步骤为:(1)制备固定化基质棕帘:棕绳编织成帘,棕帘需要先用0.3%?0.5%NaOH溶液浸泡24h,再经煮沸4?6h,121℃?20min灭菌,待用;(2)种子培养:采用菌株ATCC?21783为CGTase产生菌,投放入培养基中,培养基为:可溶性淀粉1%,蛋白胨0.5%,酵母膏0.5%,磷酸氢二钾0.1%,七水硫酸镁0.02%,碳酸钠1%,其余为净水,调整pH8.5;200rpm摇床培养3天,待光密度达到0.8,作为种子液;(3)棕绳固定化培养:培养基中接种1%?3%的光密度为0.8的种子液,投放棕帘,棕帘比表面积与培养基体积的比以cm2:mL计为1:3?2:3,pH8.5,29℃,200rpm摇床培养;培养2?3天后,至光密度达到1.0;(4)CGTase连续培养:无菌条件下将棕帘取出,首次培养发酵液离心除菌后用以制备β?环糊精;取出的棕帘用灭过菌的0.9%的生理盐水冲洗,投入新鲜配制、121℃?20min灭菌的培养基中,继续在与步骤(3)相同的条件下培养24?48h,得CGTase酶液;(5)按步骤(4)中所述方法取出棕帘,投放到下个循环中继续使用;此次及以后所得发酵液无需离心,可直接做CGTase粗酶液催化淀粉制备β?环糊精;经10?15个循环后,酶活仍可保持为初酶活的80%?90%;(6)β?环糊精的连续化制备:将所得的CGTase酶按照无溶剂法制备β?环糊精的方法,生产制备β?环糊精。