TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术联合检测艰难梭菌菌属基因及毒素基因的方法学建立
Taq?Man/MGB探针PCR技术可对粪便基因组中艰难梭菌进行菌属鉴定，同时检测毒素基因携带情况，并可判断A毒素是否存在缺失。粪便标本无需纯培养，在一个反应体系内完成菌株鉴定及毒素检测。本方法具有操作简单、重复性好、高通量检测标本、报告时间短等特点，适用临床不明原因腹泻病人病因筛查。本发明解决的技术问题是，粪便标本无需纯培养即可同时进行菌属鉴定及菌株毒素携带情况筛查，提供一种高敏感性的粪便基因组DNA中检测方法。由于传统厌氧培养不易开展，酶免方法存在方法学缺陷，该发明将明显提高艰难梭菌相关性腹泻的诊断率。同时也可用于上述疾病治疗过程中的用药监测。
发明专利
CN201310139045.2
2013-04-22
CN103215362A
2013-07-24
C12Q1/68(2006.01)I
航天中心医院
梁国威;邵冬华
100049 北京市海淀区玉泉路15号147信箱
北京;11
本发明是一种方便、快速、高敏感性的在粪便基因组DNA中直接检测艰难梭菌菌属基因磷酸丙糖异构酶(tpi)及毒素基因tcdA、tcdB及tcdAT的方法，其技术核心为TaqMan/MGB探针结合实时荧光定量PCR技术，包括：基因库检索，tpi、tcdA、tcdAt、tcdB特异性序列比对，筛选特异序列，引物和探针设计，PCR反应参数优化。其特征在于：粪便标本无需纯培养，直接检测粪便DNA中艰难梭菌tpi、tcdA、tcdAt和tcdB基因，可从菌属鉴定、毒素鉴定及A毒素是否有缺失3个方面对艰难梭菌进行同时鉴定判断，具有灵敏度高、特异性强，检测时间短(1.5小时)、操作简单、重复性好、高通量等特点。