T细胞快速增殖方法

摘要：

本发明公开了一种T细胞快速增殖方法，包括配包被液、将抗凝血离心沉降、自体血浆制备、制备重悬分离淋巴细胞、培养等步骤。本发明能快速提高T淋巴细胞体外增殖能力，2周左右T细胞数量扩增1000倍以上，达到百亿至千亿数量级，满足过继性免疫治疗的需要。较现有的T细胞扩增方法强10-50倍。体外培养1周时，该方法与传统方法差别不明显，但10天后该方法显著优于传统培养方法10倍以上。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310125663.1

申请日期：2013-04-12

公开/公告号：CN103184193A

公开/公告日：2013-07-03

主分类号：C12N5/0783(2010.01)I

申请/专利权人:阳小卫

发明/设计人:阳小卫

主申请人地址:226000 江苏省南通市长泰路128号C座206室

专利代理机构:南通市永通专利事务所 32100

代理人:葛雷

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

一种T细胞快速增殖方法，其特征是：包括下列步骤：（1）配包被液：50ml离心管中加入D?PBS20ml，无菌细胞培养级超纯水溶解的纤维连接蛋白1?5μg共，混匀；将包被液加入T175培养瓶，平放，混匀，铝箔纸包好避光，4℃放置过夜；?（2）将50ml抗凝血加到离心管，离心沉降，室温，上层为血浆层，下层为红细胞；（3）自体血浆制备：收集离心的上层血浆层，56?℃灭活，然后在4℃放置15分钟，最后900g×30min离心除去絮状沉淀，收集上清到另一支新的50ml离心管备用；（4）加入D?PBS到离心的下层红细胞层中至50ml，混匀后平均加入已经分别添加20ml淋巴分离液的两个离心管，800g×15min离心；收获分离所得的淋巴细胞层细胞于另一支50ml离心管中，用RPMI1640加满到50ml，混匀，洗涤两次；离心洗涤后，使用负压器吸掉上清液，用40ml培养液重悬分离所得的淋巴细胞；（6）将重悬的淋巴细胞悬液加入到洗涤过的T175培养瓶，加入含1%自体血浆的无血清T细胞培养液200ml，置于饱和湿度、37℃、?5.0%?CO2培养10?15天。