一种Barnase基因定量PCR检测方法及其应用

引用

摘要：

本发明公开了一种Barnase基因定量PCR检测方法及其应用，涉及分子生物学及转基因检测技术领域。本检测方法是：①检索分析Barnase基因序列；②利用该序列特征设计Barnase基因特异性定量PCR检测的引物和探针；③建立标准曲线；④定量体系的精确性验证。本检测方法应用于转基因植物及其产品中Barnase基因的检测。本发明利用发现的序列特征，首次建立Barnase基因特异性定量PCR检测方法；适用于对转基因作物及其衍生品、加工品中Barnase基因的检测、监测和安全管理。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310085894.4

申请日期：2013-03-18

公开/公告号：CN103131792A

公开/公告日：2013-06-05

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:中国农业科学院油料作物研究所

发明/设计人:李俊;吴刚;武玉花

主申请人地址:430062 湖北省武汉市武昌区徐东二路2号

专利代理机构:武汉宇晨专利事务所 42001

代理人:黄瑞棠

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

一种Barnase基因定量PCR检测方法，其特征在于：①检索分析Barnase基因序列将NCBI数据库（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）中检索的Barnase基因序列(Genbank Accession No. M14442.1)与转基因油菜MS1、MS8中的进行比对，确定了Barnase基因的检测靶标，其序列特征是：SEQ NO.1；②利用该序列特征设计Barnase基因特异性定量PCR检测的引物和探针合成引物序列如下：qBarnaseF：5’AATCAGAAGCACAAGCCCTCG 3’和qBarnaseR：5’AGTTTGCCTTCCCTGTTTGAGAA 3’；合成TaqMan探针序列如下：qBarnaseP：5’FAM－TGTCTCCGCCGATGCTTTTCCCCG－TAMRA 3’；③建立标准曲线提取样品总DNA，分别利用上述引物qBarnaseF/qBarnaseR和探针qBarnaseP组合进行实时荧光定量PCR扩增；转基因油菜MS1基因组DNA被相同浓度非转基因油菜基因组DNA稀释至不同含量，分别以100、20、4、0.8、0.016ng MS1基因组DNA的混和DNA样品，进行荧光定量PCR反应并建立标准曲线；④定量体系的精确性验证以标准曲线为参照测定含有MS1基因组DNA的混和油菜基因组DNA样品中Barnase基因的量。

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