一个高效抽提茄科类种子RNA的方法

摘要：

本发明公开了一种高效提取茄科类种子RNA的方法，该方法在于RNA抽提操作步骤难度较低、效率较高，此发明不仅可以用来抽提番茄等茄科类植物的新鲜种子，还可以抽提其干种子，它解决了常规方法提取茄科类种子时蛋白质残留量过高和RNA降解严重的难题，本发明方法可以直接用于抽提茄科类种子的RNA，具有技术易于掌握、应用性能高的优点。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310059916.X

申请日期：2013-02-26

公开/公告号：CN103074330A

公开/公告日：2013-05-01

主分类号：C12N15/10(2006.01)I

申请/专利权人:昆明理工大学

发明/设计人:韩芹芹;高凯;宋玉竹;张金阳

主申请人地址:650093 云南省昆明市五华区学府路253号

国别省市代码:云南;53

权利要求：

一种高效抽提茄科类种子RNA的方法，其特征在于按如下步骤进行：取茄科类植物的新鲜种子或干种子用质量百分比浓度为10~15%的次氯酸钠消毒10~15min后，用灭菌水清洗3~4次，将种子切开，加入液氮充分研磨成粉状；取研磨后的样品80~100mg，加入灭菌的提取液和苯酚各100~120ul，充分涡旋，在冰水混合物中冰浴10~20min，离心；离心后吸取上清液，按每毫升上清液添加500~600ul三氯甲烷/异戊醇混合液的比例在上清液中加入三氯甲烷/异戊醇混合液，充分涡旋，离心收集最上层的上清液，然后按每毫升上清液添加500~600ul苯酚/三氯甲烷混合液的比例在上清液中加入苯酚/三氯甲烷混合液，再抽提一次，离心，收集上清液；按每毫升上清液中添加1ml异丙醇的比例在上清液中加入预冷至‑20℃的异丙醇，混匀静置5~10min，离心，弃上清液，加入1~1.5ml质量百分比浓度为 75%的乙醇清洗，离心弃去乙醇后，即得胶体状RNA，干燥5~10min后用焦磷酸二乙酯溶液溶解，检测浓度后置于‑20℃备用。