一种Micro RNA表达检测方法及其定量检测试剂盒

摘要：

本发明公开了一种MicroRNA表达检测方法及其定量检测试剂盒。该方法包括：（1）提取样品的MicroRNA，将该MicroRNA连接PolyA尾巴；（2）将三条具有茎环结构的引物混合后退火处理，（3）将连有PolyA尾巴的MicroRNA与具有茎环结构的引物退火连接，（4）以该MicroRNA为模板反转录得到cDNA，（5）以该cDNA为模板，加入扩增目标MicroRNA的引物，通过荧光定量PCR方法检测目标MicroRNA表达。所述方法通过一次反转录可得到待测对象所有的MicroRNA及内参基因，大大降低了引物二聚体以及复杂发卡结构的生成，大幅度提高了对MicroRNA的检测效率。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310036690.1

申请日期：2013-01-30

公开/公告号：CN103205489A

公开/公告日：2013-07-17

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:上海黄离生物科技有限公司

发明/设计人:姚远颋;王海峰;费倩岚;谈竹君;劳昕元

主申请人地址:200233 上海市徐汇区桂平路333号6号楼306室

专利代理机构:上海智信专利代理有限公司 31002

代理人:朱水平%沈利

国别省市代码:上海;31

权利要求：

一种Micro?RNA表达检测方法，其特征在于，所述Micro?RNA表达检测方法包括以下步骤：（1）提取样品的Micro?RNA，将所得Micro?RNA连接PolyA尾巴；（2）将三条具有茎环结构的引物混合后进行退火处理，所述具有茎环结构的引物的序列分别如序列表中SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2和SEQ?IDNO:3所示；（3）将步骤（1）所得连有Poly?A尾巴的Micro?RNA与步骤（2）所得具有茎环结构的引物退火连接；（4）以步骤（3）所得Micro?RNA为模板反转录得到cDNA；（5）以步骤（4）所得cDNA为模板，加入扩增目标Micro?RNA的引物，通过荧光定量PCR方法检测目标Micro?RNA的表达。