一种D-氨基酸氧化酶的突变体酶蛋白及其制备方法

摘要：

本发明公开了一种D-氨基酸氧化酶的突变体酶蛋白及其制备方法。根据同源序列比对结果，通过定点突变技术将原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacterprotophormiae,DSM15035)中D-氨基酸氧化酶的115、119及286三个位点分别突变，构建三点突变表达载体pET-E115A/N119D/T286A，通过原核表达、纯化获得酶蛋白。所获得的突变蛋白对底物D-Met的表观二级速率常数Kcat/Km为1.39×105s-1·M-1，是野生型DAAO的5.03倍，是猪肾来源的pKDAAO蛋白的55.96倍。可以提高对部分D-氨基酸的检测效率，有较好应用价值。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310032712.7

申请日期：2013-01-29

公开/公告号：CN103103167A

公开/公告日：2013-05-15

主分类号：C12N9/06(2006.01)I

申请/专利权人:河北师范大学

发明/设计人:鞠建松;徐书景;赵宝华;李辉欣;冯利伟

主申请人地址:050024 河北省石家庄市南二环东路20号

专利代理机构:石家庄新世纪专利商标事务所有限公司 13100

代理人:董金国

国别省市代码:河北;13

权利要求：

一种D‑氨基酸氧化酶的突变体酶蛋白，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其中：（1）SEQ ID No.1所示的D‑氨基酸氧化酶的氨基酸序列中第115位的谷氨酸（E）突变为丙氨酸（A）；（2）SEQ ID No.1所示的D‑氨基酸氧化酶的氨基酸序列中第119位的天门冬酰胺（N）突变为天门冬氨酸（D）；（3）SEQ ID No.1所示的D‑氨基酸氧化酶的氨基酸序列中第286位的苏氨酸（T）突变为丙氨酸（A）。