一种产S-3-羟基丁酮基因工程菌及其构建方法与应用

摘要：

本发明公开了一种产S-3-羟基丁酮基因工程菌及其构建方法与应用，该菌株分类命名为paenibacillus??polymyxa??CGMCC??3044-Bud??A-。Bud??A为2,3-丁二醇脱氢酶基因，通过同源双交换，敲除P.polymyxa??CGMCC??3044中的Bud??A基因获得菌株p.polymyxa??CGMCC??3044-Bud??A-。通过上述方法构建的重组菌能发酵合成光学纯S-3-羟基丁酮，光学纯度可达100%，无3-羟基丁酮还原态副产物2,3-丁二醇，该菌株能直接利用菊芋菊粉、葡萄糖、丁二酮等底物，培养条件粗放，操作方便简单，光学纯度高，生产成本低，有利于大规模产业化生产。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310028092.X

申请日期：2013-01-24

公开/公告号：CN103060255A

公开/公告日：2013-04-24

主分类号：C12N1/21(2006.01)I

申请/专利权人:盐城工学院

发明/设计人:高健;徐虹;李莎;冯小海;薛锋;李凤伟;邵荣

主申请人地址:224051 江苏省盐城市迎宾大道9号

专利代理机构:南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204

代理人:肖明芳

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

一种产S??3??羟基丁酮基因工程菌，其分类命名为paenibacillus??polymyxa??CGMCC??3044??Bud??A??，该工程菌是通过下列方法构建得到：利用PCR技术从多粘类芽孢杆菌paenibacillus??polymyxa??CGMCC??3044中扩增出2,3??丁二醇脱氢酶基因Bud??A，5’端39bp碱基序列构成同源臂Ⅰ，3’端20bp碱基序列构成同源臂Ⅱ，通过多克隆位点将同源臂Ⅰ和同源臂Ⅱ分别串联到携带λRed同源重组序列克隆粘粒SuperCos??1/pIJ790的oriT复制起始序列和阿泊拉霉素抗性基因ApraR序列的两端，得到含“Bud??A同源臂Ⅰ??oriT??ApraR??Bud??A同源臂Ⅱ”序列的重组粘粒SuperCos??1/pIJ790??Bud??A同源臂Ⅰ??oriT??ApraR??Bud??A同源臂Ⅱ，重组粘粒转化paenibacillus??polymyxa??CGMCC??3044，并在λRed介导下与paenibacillus??polymyxa??CGMCC??3044发生同源双交换，得到重组的多粘类芽孢杆菌，即产S??3??羟基丁酮基因工程菌paenibacillus??polymyxa??CGMCC??3044??Bud??A??。