一种利用探针熔解技术准确检测KRAS基因突变的方法
本发明提出一种利用探针熔解技术准确检测KRAS基因突变的方法,不仅节省了耗材,同时具有高灵敏度,高特异性的特点,检测结果更可靠。该方法包括以下步骤:(1)分子信标探针和模板扩增引物的设计及合成,其中设计的上游引物(22nt)为5’-CAGACTGTGTTTCTCCCTTCTC-3’,延伸阻滞引物(36nt)为5’-taAGGTCAAGAGGACTCATGTACTGGTCCCTCATTG-3’,分子信标探针(34nt)为FAM-acgcATTGTACTCCTCTTGACCTGCTGTatgcgt-BHQ2;(2)提取被测样本的基因组DNA;(3)配制反应体系;(4)PCR反应。
发明专利
CN201310027935.4
2013-01-18
CN103088137A
2013-05-08
C12Q1/68(2006.01)I
陕西北美基因股份有限公司
陈超;戴鹏高;刘金辉;宿志瑞;邹晖
710069 陕西省西安市太白北路229号
西安智邦专利商标代理有限公司 61211
陈广民
陕西;61
一种利用探针熔解技术准确检测KRAS基因突变的方法,包括以下步骤:(1)分子信标探针和模板扩增引物的设计及合成上游引物(22nt):5’‑CAGACTGTGTTTCTCCCTTCTC‑3’延伸阻滞引物(36nt):5’‑taAGGTCAAGAGGACTCATGTACTGGTCCCTCATTG‑3’分子信标探针(34nt):FAM‑acgcATTGTACTCCTCTTGACCTGCTGTatgcgt‑BHQ2(2)提取被测样本的基因组DNA;(3)配制反应体系在反应管中加入被测样本的基因组DNA、上游引物、延伸阻滞引物、UNG酶(尿嘧啶‑N‑糖基化酶)、5’→3’外切酶活性缺失聚合酶(TIANNIUMTM Taq DNA Polymerase),dNTPs(脱氧核糖核苷三磷酸)、dUTP(脱氧尿苷三磷酸)、分子信标探针、10×PCR Buffer(TIANNIUMTM Taq PCR Buffer);(4)PCR反应将配制好的反应体系在荧光实时定量PCR仪上进行扩增和熔解,PCR反应完成后进行熔解曲线分析,通过熔解峰的Tm值判断出被测样本中是否发生了KRAS突变。