ZFNs介导的牛MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法

摘要：

本发明提供了一种ZFNs介导的牛MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法，根据牛肌肉抑制素基因序列，设计ZFNs特异位点表达载体，并根据ZFNs作用位点设计含有外源基因的且可以整合至宿主基因组中的打靶载体，然后将上述表达载体和打靶载体共同转入牛的成纤维细胞中，获得牛肌肉抑制素基因敲除且定点整合外源基因的细胞；其中，设计特异的锌指蛋白核酸酶ZFNs，其作用的DNA序列位于牛MSTN基因的外显子上。本发明构建的锌指核酶介导的打靶载体为牛MSTN基因敲除和外源基因的定点插入提供了一种简便快速的途径，对“双肌”肉牛新品种的遗传育种具有重要价值。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310026258.4

申请日期：2013-01-18

公开/公告号：CN103088046A

公开/公告日：2013-05-08

主分类号：C12N15/63(2006.01)I

申请/专利权人:内蒙古大学

发明/设计人:李荣凤;李雪玲;赵宇航;云亭;梁浩

主申请人地址:010021 内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区大学西路235号内蒙古大学

专利代理机构:北京路浩知识产权代理有限公司 11002

代理人:王朋飞%张庆敏

国别省市代码:内蒙古;15

权利要求：

ZFNs介导的牛MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法，其特征在于，其是根据牛肌肉抑制素基因序列，设计ZFNs特异位点表达载体，并根据ZFNs作用位点设计含有外源基因的且可以整合至宿主基因组中的打靶载体，然后将上述表达载体和打靶载体共同转入牛的成纤维细胞中，获得牛肌肉抑制素基因敲除且定点整合外源基因的细胞；其中，设计特异的锌指蛋白核酸酶ZFNs，其作用的DNA序列位于牛MSTN基因的外显子上。