一种农杆菌介导的培育转基因旱柳植株的方法
一种农杆菌介导的培育转基因旱柳植株的方法，涉及一种培育转基因旱柳植株的方法。是要解决现有的方法无法从柳树的转基因愈伤组织中诱导抗性芽，因此无法获得柳树的转基因植株的问题。方法：一、旱柳种子消毒，预培养；二、挑取携带pBI121载体的根癌农杆菌，培养得菌液；三、将种子从基部切除萌发出来的顶芽部位作为外植体，置于菌液中浸泡；四、取出用滤纸吸干，接入共培养培养基；五、转入选择培养基，至长出抗性芽，转入光照条件，筛选抗性芽；六、抗性芽转到伸长培养基；七、将切下茎段，转到生根培养基培养至长出根系；八、进行PCR及GUS染色检测，移栽到土里，即获得转基因旱柳植株。本发明用于培育转基因旱柳植株。
发明专利
CN201310021280.X
2013-01-21
CN103060372A
2013-04-24
C12N15/84(2006.01)I
东北林业大学
李成浩;杨静莉;许雪梅
150040 黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号
哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109
王艳萍
黑龙江;23
一种农杆菌介导的培育转基因旱柳植株的方法，其特征在于农杆菌介导的培育转基因旱柳植株的方法，按以下步骤进行：一、将成熟的旱柳种子消毒，然后将消毒的种子接种于预培养培养基中培养4??8天，得到萌发的种子；二、挑取单个携带pBI121载体的根癌农杆菌菌落，接入含有50mg/L卡那霉素的LB液体培养基中，28℃过夜培养，得到OD600为0.2??1.2的农杆菌菌液；三、将步骤一中预培养得到的萌发的种子从基部切除萌发出来的顶芽部位，保留2片子叶，将切除顶芽的萌发种子作为外植体，将外植体置于步骤二中制备的OD600为0.2??1.2的农杆菌菌液中浸泡30??40分钟；四、然后将外植体从农杆菌菌液中取出，用无菌滤纸吸干菌液，接入共培养培养基中，暗培养1??5天，培养温度为25℃；五、然后将外植体转入选择培养基中，暗培养至长出丛生的抗性芽，然后转入光照条件下培养8周，每4周更换一次培养基，筛选丛生的抗性芽；六、将步骤五中筛选出的丛生的抗性芽转到伸长培养基培养4周，获得伸长的抗性芽；七、将步骤六获得的伸长的抗性芽的茎段切下后，转到生根培养基中进行生根培养，培养至长出根系，获得候选植株；八、对候选植株进行PCR检测及GUS染色检测，将PCR检测和GUS染色检测均为阳性的候选植株移栽到土里，即获得转基因旱柳植株。