一种分离乳酸杆菌的方法

摘要：

本发明公开了一种分离乳酸杆菌的方法，其步骤是：A、将MRS固体培养基调节pH后装入生理盐水瓶，充入二氧化碳使培养基中氧气消耗殆尽，密封，灭菌，45度倾斜放置，培养基形成斜面，自然冷却；B、将待分离的样品用无菌双蒸水混合，涡旋后静置；C、移取上清进行稀释，分别取10-3、10-4、10-5三个稀释，分别用注射器注入到生理盐水瓶的斜面上，转动生理盐水瓶，使样品均匀分布在生理盐水瓶中的斜面培养基上；D、倒置于生化培养箱中培养，乳酸杆菌将在培养基表面被分离出来。方法易行，操作简便，该方法可以用于实验室乳酸杆菌的分离，同时适合在样品采集地点进行乳酸杆菌的野外分离，并显著减少工作量。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201310010005.8

申请日期：2013-01-11

公开/公告号：CN103045523A

公开/公告日：2013-04-17

主分类号：C12N1/20(2006.01)I

申请/专利权人:中国科学院亚热带农业生态研究所

发明/设计人:王升平;印遇龙;李丽立;熊霞;范觉鑫;刘惠知;周映华;胡新旭;高书峰;周小玲;缪东;舒燕;曾发姣

主申请人地址:410125 湖南省长沙市芙蓉区远大二路1071号

专利代理机构:武汉宇晨专利事务所 42001

代理人:王敏锋

国别省市代码:湖南;43

权利要求：

一种分离乳酸杆菌的方法，其步骤是：将配制的MRS固体培养基调节pH6.0??6.6后，装入100??150毫升培养基于250毫升生理盐水瓶中，充入二氧化碳气体至培养基中氧气消耗殆尽，将一细线的一端置于瓶内，另一端置于瓶外，用橡胶盖塞住瓶口，然后用封口膜密封，置于灭菌锅115??℃灭菌13??18分钟，拔掉细线，以45度角倾斜放置，使培养基形成斜面，自然冷却到培养基凝固；将待分离的样品用无菌双蒸水以体积比1:10混合，涡旋一分钟后静置3??6分钟；移取上清1毫升进行10倍倍比稀释，然后分别取10??3、10??4、10??5三个稀释度各200微升样品，用注射器注入A步中所制备的装有固体培养基的250毫升生理盐水瓶中，用蜡密封好注射过程中注射器留在生理盐水瓶上橡胶塞的注射孔，转动生理盐水瓶，使样品均匀分布在生理盐水瓶中培养基的斜面上；将生理盐水瓶倒置于生化培养箱中29??31℃恒温培养46??50小时，乳酸杆菌在生理盐水瓶的斜面培养基上被分离出来；所述MRS固体培养基为：组成成份????????????????重量份牛肉蛋白粉????????8??12鱼肉汁????????????????8??12酵母浸出汁粉??????????????3??7葡萄糖????????18??22醋酸钠????????3??7柠檬酸二铵??????????????1??3吐温80??????????????0.08????0.2硫酸镁????????0.48????0.68硫酸锰??????????????????????0.18????0.38琼脂粉????????13??17蒸溜水????????800??1200。