一种仿生制备氧化硅纳米微囊固定化酶的方法
本发明是一种仿生制备氧化硅纳米微囊固定化酶的工艺方法。该方法首先将酶包裹于脂质体纳米微囊中，然后以脂质体纳米微囊为模板在诱导剂聚二甲基二烯丙基铵的作用下，正硅酸甲酯水解液在脂质体表面脱水形成氧化硅壳层，完全避免了酶与硅前驱体的直接接触，进而实现了固定化酶保持较高活性的目的。同时，以脂质体纳米微囊为模板可实现形貌可控的氧化硅纳米微囊的制备，最后利用低浓度表面活性剂聚乙二醇辛基苯基醚去除脂质体模板。本发明制备固定化酶的方法，包埋率可达50%左右，避免了溶胶-凝胶法造成游离酶的大量浪费，从而降低了固定成本；反应主要涉及水相，安全无污染；制备工艺简单，条件温和，酶活回收率高达71.8%。
发明专利
CN201310004507.X
2013-01-07
CN103060306A
2013-04-24
C12N11/14(2006.01)I
河北工业大学
姜艳军;朱亚男;高静;戴舒;张炜
300401 天津市北辰区西平道5340号河北工业大学
天津翰林知识产权代理事务所(普通合伙) 12210
赵凤英
天津;12
一种仿生制备氧化硅纳米微囊固定化酶的方法，其特征为包括以下步骤：??（1）脂质体模板的制备：将卵磷脂和胆固醇加入到氯仿中形成a溶液，得到的a溶液中的卵磷脂和胆固醇浓度分别为50mg/mL和12.5mg/mL；取上述a溶液进行旋转蒸发，直至将氯仿除尽，在反应器上形成均匀透明的薄膜；再加入0.2mg/mL葡萄糖氧化酶溶液使薄膜溶解，经超声分散2h，得到终浓度为18.75mg/mL脂质体溶液；??（2）包覆诱导剂的脂质体微囊的制备：取上述脂质体溶液，在剧烈震荡的情况下缓慢滴加诱导剂，其中，诱导剂浓度为2mg/mL，滴加量为脂质体溶液体积的15%??40%；震荡5min后，用蒸馏水离心洗涤，除去游离的诱导剂和未包埋的游离酶；最后用0.1mol/L、pH7的磷酸缓冲液将包覆诱导剂的脂质体配成浓度为18.75mg脂质体/mL的乳浊液；??（3）氧化硅壳层的制备：在剧烈震荡的下向上步得到的乳浊液缓慢滴加硅醇溶液，滴加完毕后继续缓慢摇动0.5??1.0h，然后用蒸馏水离心洗涤，最后离心分离，得包覆葡萄糖氧化酶的氧化硅纳米微囊；??其中，硅醇溶液浓度为54.82mmol/L，滴加量为脂质体溶液体积的40%??60%；??（4）去除模板：将氧化硅纳米微囊浸泡于质量分数0.3%的聚乙二醇辛基苯基醚溶液中，所取聚乙二醇辛基苯基醚溶液体积为步骤（2）所取脂质体溶液体积的3倍；30min后用蒸馏水洗涤，直至加入蒸馏水后晃动无白色泡沫出现；然后离心分离，所得固体为除去模板后包裹酶的氧化硅纳米微囊。??