一种人脂肪间充质干细胞库及其构建方法
本发明公开一种人脂肪间充质干细胞库及其构建方法，本发明人脂肪间充质干细胞库由下述步骤构建得到：（1）无菌采集人体脂肪；（2）油脂的去除；（3）胶原酶消化；（4）红细胞的裂解；（5）扩大培养；（6）冻存。人脂肪间质干细胞是脂肪组织中一类多能性干细胞，能诱导分化形成脂肪、骨、软骨、肌肉等组织类型细胞。脂肪组织来源广泛、取材容易、不涉及伦理问题、便于自体移植、给患者带来的痛苦较小；而且与骨髓等来源的间充质干细胞相比，脂肪来源间充质干细胞增殖快，分离效率高。
发明专利
CN201310000647.X
2013-01-04
CN103074298A
2013-05-01
C12N5/0775(2010.01)I
广州爱菲科生物科技有限公司
冯文峰;列浦昌;佘志勇;方海庆
510070 广东省广州市先烈中路76号中侨大厦13楼G室
深圳汇智容达专利商标事务所(普通合伙) 44238
刘新年
广东;44
一种人脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，包括下述步骤：（1）无菌采集人体脂肪；（2）油脂的去除：将脂肪剪碎，收集于离心管中，加入等体积的磷酸盐缓冲液，剧烈震荡后室温静置分层，收集上层部分用磷酸盐缓冲液洗涤；（3）胶原酶消化：加入等体积的胶原酶消化；加入等体积的含10%血清的DMEM‑LG终止消化，充分混均后室温静置10min分层；去掉上层，离心，收集下层部分；（4）红细胞的裂解：加入2倍体积的红细胞裂解液重悬3 min，离心，弃上清；用PBS液清洗，40μm滤膜过滤后，向所得细胞中加含10%血清的DMEM‑LG培养液，离心收集细胞，并于100U/mL青霉素/链霉素、10% 血清的DMEM‑LG中培养，即获得人脂肪间充质干细胞；（5）扩大培养：对人脂肪间充质干细胞进行扩大培养；（6）冻存：收集扩大培养后的人脂肪间充质干细胞于冻存液中，置液氮冷冻，按ABO/RH分型和HLA分型进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，即构建出人脂肪间充质干细胞库。