一种以蕲蛇为原料提取Ⅱ型胶原蛋白的方法
本发明提供了一种以蕲蛇为原料提取Ⅱ型胶原蛋白的方法。所述方法包括:将蕲蛇粉末用盐酸胍-Tris-HCl混合溶液除去蛋白多糖;除去多糖后收集沉淀,用乙酸溶液溶解沉淀;溶液采用胃蛋白酶酶解释放Ⅱ型胶原蛋白;酶解液离心后取上清进行盐析充分沉淀Ⅱ型胶原蛋白;离心收集沉淀Ⅱ型胶原蛋白离心并用乙酸再次溶解,溶解液透析除胃蛋白酶和其他杂蛋白;透析袋中Ⅱ型胶原蛋白再次使用乙酸溶解并透析除去盐离子;将透析后的袋内液体低温冷冻真空干燥,得到蕲蛇Ⅱ型胶原蛋白。本发明的有益效果主要体现在:本发明方法操作简单,制得Ⅱ型胶原蛋白纯度高。
发明专利
CN201210591584.5
2012-12-30
CN103088096A
2013-05-08
C12P21/06(2006.01)I
浙江中医药大学
丁兴红;谷恒存;丁志山;蒋福升;范永升
310053 浙江省杭州市滨江区滨文路548号
杭州天正专利事务所有限公司 33201
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一种以蕲蛇为原料提取Ⅱ型胶原蛋白的方法,所述方法包括:(1)蕲蛇粉末用盐酸胍‑Tris‑HCl混合溶液混悬,4~6℃搅拌24~30h,离心,去上清,沉淀用40~60 mM Tris‑HCl溶液洗涤除去盐酸胍;所述盐酸胍‑Tris‑HCl混合溶液中盐酸胍浓度为4~5M,Tris‑HCl浓度为40~60 mM;(2)步骤(1)所得沉淀用0.5~1 M乙酸水溶液重悬,以60~80%甲酸水溶液调节pH值为2~3,加入足量胃蛋白酶,4~6℃搅拌48~60h,离心,弃去沉淀;(3)步骤(2)得到上清液滴加5~6M NaCl溶液至NaCl浓度为0.8~0.9 M,4~6℃静置12~24h,离心,去除上清液;(4)步骤(3)得到沉淀用足量0.05~0.2 M乙酸溶解,转入截留分子量50000道尔顿的透析袋中、用20~30 mM Na2HPO4充分透析,所得沉淀再用足量0.05~0.2M乙酸溶解,转入截留分子量10000道尔顿的透析袋中、用0.05~0.2M乙酸溶液充分透析,所得液体真空干燥,得到所述Ⅱ型胶原蛋白的粉末。